[发明专利]一种曲霉菌Aspergillus sp.G12及其发酵制备异紫堇定碱的方法

说明书

本发明提供了一种曲霉菌Aspergillus sp.G12及其发酵制备异紫堇定碱的方法，属于微生物代谢技术领域，所述的曲霉菌Aspergillus sp.G12的保藏编号为CCTCCNO：M 2020128，所述方法包括以下步骤：马铃薯培养基经曲霉菌Aspergillus sp.G12固体发酵，通过超声提取、过滤、浓缩后，采用硅胶和凝胶柱层析分离得到异紫堇定碱。本发明所述方法高效、无污染、反应条件温和、操作设备简单、易于扩大生产，得到的异紫堇定碱产量高、纯度高。

技术领域

本发明涉及微生物代谢技术领域，具体涉及一种曲霉菌Aspergillus sp.G12及其发酵制备异紫堇定碱的方法。

背景技术

曲霉属真菌(Aspergillus spp.)隶属于曲霉目，自然界中分布极广，是引起霉腐的主要微生物之一，如：面包腐败、粮食霉变等，更有甚者，产生致癌性物质黄曲霉毒素。但是曲霉属菌也有有益的一面，如酿酒、酱油和豆酱等制作过程中，曲霉属产生大量有益物质如蛋白酶、衣康酸、柠檬酸等。由于在食品工业和医药生产中应用广泛，曲霉菌已经成为人们开发利用的重要真菌之一。

异紫堇定碱(isocorydine)，又名异可利定，属于天然阿朴菲类生物碱，主要存在于植物中，如于樟科、马钱科、木兰科、芸香科、防己科、大戟科、小檗科、番荔枝科、毛茛科、马兜铃科、罂粟科等。异紫堇定碱具有抗菌、抗肿瘤、解痉镇痛、舒张血管、抗心律不齐、抗疟、抗氧化、等多种药理作用。国家食品药品监督管理局已于2010年批准异紫堇碱盐酸盐(盐酸异可利定片)作为解痉镇痛处方药用于胃、肠、胆、胰、子宫、血管痉挛所致的疼痛。

微生物代谢中会产生丰富的代谢产物，包括初级代谢产物和次级代谢产物，次级代谢产物往往结构复杂，其中包括大量具有生物活性的化合物。通过微生物发酵获取活性物质的技术在发酵工程技术在食品、医药、精细化学品、生物能源、生物材料以及生物质资源化方面发挥着重要作用，对国民经济所作的贡献令人瞩目。

目前，异紫堇定碱主要从植物中提取或化学合成方式制备得到，尚未见有其他制备方法得到异紫堇定碱的报道。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种曲霉菌Aspergillus sp.G12及其发酵制备异紫堇定碱的方法，本发明利用曲霉菌Aspergillus sp.G12固体发酵得到异紫堇定碱，且本发明制备异紫堇定碱的方法操作简单、绿色无污染、条件温和、易于产业化，制备得到的异紫堇定碱产量高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种曲霉菌Aspergillus sp.G12，所述的曲霉菌Aspergillussp.G12的保藏编号为CCTCC NO：M 2020128。

本发明还提供了一种利用上述的曲霉菌Aspergillus sp.G12发酵制备异紫堇定碱的方法，包括如下步骤：

1)将所述的曲霉菌Aspergillus sp.G12接到马铃薯葡萄糖种子培养基中培养，得到的种子培养液；

2)将得到的种子培养液接种于固体发酵培养基中，进行发酵培养，得到包括异紫堇定碱发酵产物。

优选地，上述制备异紫堇定碱的方法还包括如下步骤；

a)将得到的发酵产物用醇溶液浸泡、提取、过滤，得到滤液，干燥所述滤液得到异紫堇定碱的粗提物；

b)采用硅胶柱对所述异紫堇定碱的粗提物进行梯度洗脱分离，将含有异紫堇定碱的洗脱液合并，浓缩，得到浓缩液a，用凝胶柱柱层析纯化浓缩液a，收集层析液，将含有异紫堇定碱的层析液合并，得到组分b，干燥所述的组分b，得到纯品异紫堇定碱。

优选地，所述固体发酵培养基为马铃薯培养基；所述固体发酵培养基的制备方法包括将马铃薯去皮后切丁、灭菌获得所述固体发酵培养基。