[发明专利]一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法

说明书

本发明公开了一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法，属于变性蛋白提取技术领域，所述步骤包括，准备实验器具和鲜组织样本，把组织样本在液氮的环境下研磨，使用BPP提取液对研磨后的组织样本进行混合离心处理得到混合液，对混合液进行洗涤，提取蛋白。本发明具有广谱性，使用超声后漩涡震荡时单次时间短，可以有效的避免蛋白结构的断裂和引入新的结构，有效地解决了双向电泳蛋白质样品制备中的盐离子问题，可广泛应用于各种植物，应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及变性蛋白提取技术领域，尤其涉及一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法。

背景技术

蛋白质组学研究中，目前最有效的方法是通过双向电泳技术(2-DE)分离蛋白质，然后对分离蛋白进行质谱鉴定。由于各种用于双向电泳的蛋白质提取方法，往往因为植物种类和组织部位的不同而差别很大，因此，提取高质量的蛋白质，成为双向电泳以及后期质谱鉴定工作中最具挑战性的工作之一。植物组织，特别是甘蔗组织通常含有大量顽拗性物质，如多糖、醌类和多酚等，会影响双向电泳分离蛋白的效果，进而干扰后期的质谱鉴定工作。

TCA法是一种经典而有效适用于双向电泳的蛋白质样品制备方法，其最大的优越性在于能够快速有效的抑制各种蛋白酶的活性。但该法主要应用在动物及某些模式植物中；另外，该法的明显缺陷是经过TCA沉淀下来的蛋白质很难溶解，并且没有办法去除样品中的盐离子。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法，解决背景技术中提到的技术问题。

一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法的制备方法，所述方法包括如下步骤：

步骤1：准备实验器具和鲜组织样本；

步骤2：把组织样本在液氮的环境下研磨；

步骤3：使用BPP提取液对研磨后的组织样本进行混合离心处理得到混合液；

步骤4：对混合液进行洗涤，提取蛋白。

进一步地，所述步骤1的具体过程为：

步骤1.1：液氮准备，从液氮罐中倒取液氮到保温杯，准备研钵及研棒，倒入覆盖表面的无水酒精，灼烧后备用；

步骤1.2：准备新鲜组织样本或从低温冰箱中取出组织样品，暂存于冰盒，立即连同盛有样品的容器一起称重，并记录重量。

进一步地，所述步骤2的具体过程为：

步骤2.1：研磨开始前，研钵及研棒提前用液氮预冷；准备一个离心管，标记样品名，放入盛有液氮的保温杯预冷；

步骤2.2：取称量好的组织样本，放入预冷的研钵中，并快速搅动磨成干粉状，在研磨过程中一边研磨一边补充液氮保持样品低温；

步骤2.3：研磨完成后，加入刚没过组织样本的液氮，将不锈钢药勺在液氮中预冷，并将溅在研钵内的粉末用药勺集中到研钵底部，将组织粉末收集到上述预冷的对应离心管中，重新投入液氮中备用；

步骤2.4：将空的锡纸和离心管称重，精确到0.1g，并样品粉末加入到锡纸戒离心管称重，计算组织样品质量。

进一步地，所述步骤3的具体过程为：

步骤3.1：根据组织样品质量，计算BPP提取液用量，BPP提取液的用量为每克的组织样品使用7ml BPP提取缓冲液。BPP提取缓冲液包括100mmol/L EDTA,50mmol/L硼砂，50mmol/L维生素C，1％PVPP，1％Triton X-100，0.1％β-巯基乙醇，25％蔗糖，10mmol/LTris碱，Ph7.8)。