[发明专利]一株能生产低乙醛含量啤酒的啤酒酵母及其驯化方法

说明书

本发明提出一株能生产低乙醛含量啤酒的啤酒酵母及其驯化方法，其中该啤酒酵母为DY‑01，其保藏编号为CGMCC No.19840，于2020年05月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。该驯化方法主要包括：适应性进化处理、驯化处理、酶标测定及发酵结果评价与筛选等步骤。本发明的驯化方法并未对菌株进行剧烈的诱变处理，也未对菌株基因组产生剧烈变化，而是通过适应性进化的方法，通过在培养基中添加乙醇脱氢酶阻遏剂和乙醛脱氢酶阻遏剂，使得啤酒酵母的乙醇脱氢酶(ADH2)和乙醛脱氢酶(ALDH)的均活性得以提升，进一步提高了乙醛代谢为乙醇和乙酸的能力。本发明在啤酒酵母及其驯化方法领域具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于啤酒酵母及其驯化方法领域，尤其涉及一株能生产低乙醛含量啤酒的啤酒酵母及其驯化方法。

背景技术

乙醛，是啤酒中含量最高的挥发性醛类，占啤酒中总醛的60％。乙醛的水平会影响啤酒的风味和老化速度，当含量过高时会使啤酒产生令人不适的青草味或不成熟的青苹果味，而成熟的优质啤酒乙醛含量一般在3-8mg/L。因此，降低啤酒中的乙醛含量是无数啤酒从业者的重要目标。

目前，许多降低啤酒中乙醛含量的措施也被开发出来，主要包括工艺参数的改进和基因组修饰获得工程菌等。其中，尽管通过改进工艺参数能够达到一定的效果，但乙醛含量并无实质性的降低；而利用基因组修饰的方式改造酵母获得工程菌时，需要对菌株进行强烈的诱变，对菌株基因组的改变较大，进而影响菌株的稳定性和啤酒成品的风味，也较难应用于实际生产中。因此如何开发出一种性能稳定的、能生产低乙醛含量啤酒的啤酒酵母及其驯化方法是一项十分重要的课题。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的降低乙醛含量效果差、诱变法导致菌株稳定性差等的技术问题，提出一株不需进行剧烈诱变的、性能稳定的能生产低乙醛含量啤酒的啤酒酵母及其驯化方法。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一株能生产低乙醛含量啤酒的啤酒酵母，所述啤酒酵母为DY-01，其保藏编号为CGMCC No.19840，分类命名为Saccharomyces pastorianus，于2020 年05月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

一种获得能生产低乙醛含量啤酒的啤酒酵母的驯化方法，所述方法包括如下步骤：

出发菌株接种至乙醇-YNB液体培养基中培养后得到菌液；

将所述菌液转接至添加乙醇脱氢酶阻遏剂的乙醇-YNB液体培养基中培养生成液滴，使菌株在所述液滴中进行适应性进化；

根据OD₆₀₀的增长速度，从进行适应性进化后的液滴中选取增长最快的液滴转接至双硫仑培养基中生成液滴，并进行驯化处理；

经驯化处理后的液滴涂布于YPD固体培养基上，挑取单菌落接种于所述乙醇-YNB液体培养基中进行酶标测定，根据OD₆₀₀的增长速度筛选出复筛菌株；

对所述复筛菌株进行发酵，发酵结束后选出产乙醛量最低的菌株，即为所述啤酒酵母。

作为优选，将所述出发菌株接种至乙醇-YNB液体培养基中培养后，菌液的OD₆₀₀＝0.4～0.6，优选OD₆₀₀＝0.5。

作为优选，所述适应性进化步骤在微生物液滴培养仪的适应性进化模式下进行；

其中，微生物液滴培养仪为全自动高通量微生物液滴培养仪。

作为优选，所述适应性进化步骤具体为：

将所述液滴转接至含0.1g/L乙醇脱氢酶阻遏剂的乙醇-YNB液体培养基中，培养50-55h后自动传代3代；