[发明专利]一种超声辅助离子液体分散液液微萃取HPLC法检测抗艾药含量的方法

说明书

本发明涉及一种超声辅助离子液体分散液液微萃取HPLC法检测抗艾药含量的方法。在超声帮助下，无需分散剂疏水性离子液体1‑辛基‑3‑甲基咪唑六氟磷酸盐([C₈mimPF₆])即可形成细小的液滴分散在样品溶液中，从而有效萃取分析ACC007，萃取率在94.0％以上。对实验条件如萃取剂的种类和用量、萃取时间、萃取温度、溶液pH、冷却时间和离心时间等进行了优化。在优化条件下，标准工作曲线Y＝10.735x‑0.328(r＝0.9994)的线性范围为0.50‑30.0μg/mL，检测限分别为0.072μg/mL(药片)和0.10μg/mL(血清)，加标回收率为90.5％‑103.4％。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种超声辅助离子液体分散液液微萃取HPLC法检测抗艾药含量的方法。

背景技术

艾滋病又名获得性免疫缺陷综合征，是由人免疫缺陷病毒感染而导致的致死性较高的一种疾病。目前国际上治疗艾滋病的药物有6大类30多种，分别为核苷类逆转录酶、非核苷类逆转录酶、蛋白酶、整合酶、融合酶和CCR5抑制剂。ACC007属于第三代口服非核苷类逆转录酶抑制剂，其结构：中文名为3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氢嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈。作为一类抗艾滋病新药，ACC007具有优良的抗病毒活性和很好的安全性。关于ACC007含量的测定方法，目前报道的很少。文献调研显示黄洁琼研究了用LC-MS/MS法测定复方制剂和比格犬血浆中的ACC007，但液质联用仪价格较高一般实验室难以普及。当分析基体比较复杂物质含量较低的样品时，常需结合使用分离富集技术。近来分析化学的发展趋势是向着简单化、微型化、有机试剂消耗最小化方向发展，其中液相微萃取技术已经显示了高的样品萃取能力和富集效果。近来疏水性离子液体由于具有在水中溶解度小、挥发性低、毒性低对环境友好等特点，已被用来取代传统的有机溶剂而作为萃取剂使用。当使用离子液体作为萃取剂时，由于离子液体黏度较大，为了改善离子液体在样品溶液中的分散效果以提高萃取率，常需使用一定的分散剂如甲醇^]、乙腈、丙酮^]等。这些试剂的使用会增大有机试剂消耗量。如使用超声能量对溶液进行超声时，溶液中会形成亚微米尺寸的液滴，互不相溶的两相间接触面会增大从而加速物质的转移，有时甚至不用分散剂也可获得很高的萃取率，从而可减少有机溶剂的使用。

本发明首次提出了用超声辅助离子液体分散液液微萃取HPLC法测定人血清及药物中ACC007的含量。实验结果表明在超声的作用下，不需要使用任何分散剂萃取率在94.0％以上。申请人在先申请中还记载了一种紫外分光度测定法(中国发明专利申请号：202010396593.3)。

发明内容

本发明提供一种超声辅助离子液体分散液液微萃取HPLC法检测抗艾药ACC007含量的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)萃取：在10.0mL离心管中，分别加入2.0mL pH 4.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液、适量的待测ACC007样品溶液、80μL离子液体，加蒸馏水至刻度线(即定容至10mL)，超声10min后，将离心管冷却至5℃，并保持5℃15min，再用离心机离心5min后，分层，去除上层水溶液，将下层离子液体相用乙醇稀释至1.0mL，得待测液；

(2)检测：取步骤(1)得到的待测液，用HPLC法测定ACC007的峰面积；

(3)计算含量：将步骤(2)测得的峰面积，代入标准工作曲线方程即得ACC007的含量。

步骤(1)中离子液体选自1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐[C₈mimPF₆]；超声频率选自40kHz；离心转速选自2500r/min，离心时间优选5min。所述待测ACC007样品溶液为ACC007样品的乙醇溶液，其用量优选100-200μL，进一步优选100μL。