[发明专利]一种表达脂肪酶的山羊葡萄球菌株NCU S6

说明书

一种表达脂肪酶的山羊葡萄球菌株NCU S6，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.19356。本发明提供的山羊葡萄球菌株NCU S6能耐中碳链脂肪酸且高效表达脂肪酶，其发酵液的脂肪酶酶活高达4927.3U/mL，最适作用pH均为8.0，最适作用温度均为37℃。山羊葡萄球菌株NCU S6表达的脂肪酶能显著提高生物酶法转化樟树籽仁油制备中碳链结构油脂的得率，在生物酶法制备中碳链结构油脂等领域有较强的应用价值，有利于促进我国来源丰富的樟树资源的高值化开发利用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种表达脂肪酶的山羊葡萄球菌株（Staphylococcus caprae）NCU S6。

背景技术

脂肪酶（1ipase，EC3.1.1.3）是一类特殊的酯键水解酶，可以催化酯类化合物的水解、醇解、酯化、酯交换以及化合物的合成等反应。其广泛来源于动物、植物和微生物中。哺乳动物的胰脏和脂肪组织中含脂肪酶较多；植物中含脂肪酶较多的是油料作物的种子，如蓖麻籽、油菜籽等；细菌、真菌和酵母中的脂肪酶含量更为丰富。由于微生物种类多、繁殖快、受季节等波动影响小，具有比动植物更广的作用pH和温度范围以及底物专一性，且微生物来源的脂肪酶一般都是分泌性的胞外酶，工业用途的酶制剂基本上都来源于微生物，因此微生物脂肪酶是工业用脂肪酶的重要来源，可应用于食品、医药、洗涤剂、纺织、生物柴油、造纸、皮革、化妆品和环境保护等多个工业领域。

由于商业脂肪酶价格昂贵，使“采用脂肪酶催化樟树籽仁油等中碳链油脂与亚麻籽油等亚麻酸亚油酸系油脂进行酯化、酯交换而制备具有特殊生理功能的结构脂技术”的生产成本过高，故采用微生物脂肪酶用于制备基于樟树籽仁油、富含辛酸和癸酸及必需脂肪酸或功能脂肪酸的中长碳链功能油脂，可大幅降低中长碳链功能油脂生产成本。

实施“采用脂肪酶催化樟树籽仁油等中碳链油脂与亚麻籽油等亚麻酸亚油酸系油脂进行酯化、酯交换而制备具有特殊生理功能的结构脂”的工业化生产的关键，是筛选出高产脂肪酶且耐中碳链脂肪酸（Medium Chain Fatty Acids，MCFA）型菌株，直接采用菌株发酵液催化中碳链油脂与亚麻酸亚油酸系油脂之间的酯化、酯交换，大幅降低结构油脂的生产成本。国内现无相关针对该问题的菌株筛选技术及实例报道，本发明使用营养肉汤培养基平板富集，三丁酸甘油酯平板法、脱脂奶平板法初筛，罗丹明B平板法、橄榄油摇瓶复筛等方法，自樟树籽仁油生产废渣周围下水道中筛选出耐中碳链脂肪酸、产脂肪酶能力强、适用于以中碳链油脂为原料制备结构油脂的菌株。

发明内容

本发明的目的是提供一种表达脂肪酶的山羊葡萄球菌株（Staphylococcuscaprae）NCU S6，它能高产脂肪酶且耐MCFA，适用于通过微生物酶法构建和制备一种基于樟树籽仁油、富含辛酸和癸酸及必需脂肪酸或功能脂肪酸的中长碳链功能油脂。

本发明是通过以下技术方案实现的。

表达脂肪酶的山羊葡萄球菌株（Staphylococcus caprae）NCU S6，已于2020年1月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），其简称为CGMCC，保藏编号为 CGMCC No.19356。

所述的山羊葡萄球菌株NCU S6在营养琼脂培养基上培养24h后，菌落呈球形或稍呈椭圆形凸起、直径1-2mm，排列成葡萄状、边缘整齐，表面光滑，湿润并且不透明的菌落。革兰氏染色为阳性，在显微镜下观察细胞形态为圆球状，直径0.5～1.5μm左右，无芽孢、鞭毛和荚膜。该菌株的菌落形态和革兰氏染色后的细胞形态示于图1和图2中。

所述的山羊葡萄球菌株NCU S6接触酶实验为阳性，氧化酶实验、血浆凝固酶实验为阴性，新生霉素敏感实验表现为敏感型，能利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，能水解底物如紫苏油、亚麻油、大豆油、米糠油、橄榄油。