[发明专利]一种鉴别虾虎鱼性别的方法

说明书

本发明公开了一种鉴别虾虎鱼性别的方法。本发明的鉴别虾虎鱼性别的鉴别引物，具体如下：上游引物：5’‑CAGATGCCTCATAGTGATGGACG‑3’，具体如SEQ ID NO:1所示；下游引物：5’‑GCTGCTGTTGTTGCTGCTGTG‑3’，具体如SEQ ID NO:2所示。本发明利用鉴别虾虎鱼性别的鉴别引物，按照本发明的方法可以快速，准确的鉴别出虾虎鱼的性别。与传统利用形态学鉴别雌雄的方法相比，利用分子生物学层次的手段，可克服因性腺未发育成熟或无明显第二性征等无法鉴别雌雄的问题；与利用组织学切片方法鉴别雌雄的技术相比，本发明方法可明显增加检测时效，并降低检测成本。本方法是对当前虾虎鱼科鱼类性别鉴别技术的重大提升和补充。

技术领域：

本发明属于鱼类雌雄鉴别技术领域，更具体地说，本发明涉及一种鉴别虾虎鱼性别的方法。

背景技术：

虾虎鱼科(Gobiidae)是鱼类中最大的科之一，目前已知种类超过2000种，广泛分布于全球除南北极外的各海淡水区域，且绝大多数具有体型小、繁殖力强等特点，强大的繁殖能力可能是其实现全球广泛分布的重要原因之一。目前关于虾虎鱼科鱼类性别决定机制研究的报道较少，尚未在虾虎鱼科鱼类中发现性染色体、且性别决定关键基因尚不明确，为虾虎鱼科鱼类快速性别鉴定带来诸多不便，如较难通过外观对未性成熟虾虎鱼进行雌雄鉴别。利用性别决定关键基因，建立虾虎鱼雄性性别快速鉴别技术，对研究虾虎鱼科鱼类的生殖、进化、生态适应性策略等均具有重要价值。

目前，基于传统形态学性别鉴别方法较难对无第二性征或尚未性成熟虾虎鱼进行性别鉴定，基于病理组织切片的性别鉴别方法存在周期长、费用高、操作不便利等问题。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一种快速、准确鉴别虾虎鱼性别的鉴别引物。

本发明的鉴别虾虎鱼性别的鉴别引物，具体如下：

上游引物：5’-CAGATGCCTCATAGTGATGGACG-3’，具体如SEQ ID NO:1所示；

下游引物：5’-GCTGCTGTTGTTGCTGCTGTG-3’，具体如SEQ ID NO:2所示。

本发明的第二个目的是提供一种鉴别虾虎鱼性别的方法，其是以虾虎鱼性腺cDNA为模板，以上述鉴别虾虎鱼性别的鉴别引物为引物进行扩增，如果能扩增出目的片段则为雄性，如果不能扩增出目的片段则为雌性；

或者以虾虎鱼性腺cDNA为模板，以上述鉴别虾虎鱼性别的鉴别引物为引物，利用含有SYBRgreen等核酸染料的PCR试剂，进行PCR扩增和荧光数值采集，如果能检测到△Ct值则为雄性，否则为雌性。

优选，所述的虾虎鱼是诸氏鲻虾虎鱼。

本发明的第三个目的是提供一种鉴别虾虎鱼性别的试剂盒，其含有上述鉴别虾虎鱼性别的鉴别引物，和PCR反应试剂或含有SYBR green等核酸染料的PCR试剂。

利用本发明鉴别虾虎鱼性别的鉴别引物，按照本发明的方法可以快速，准确的鉴别出虾虎鱼的性别。与传统利用形态学鉴别雌雄的方法相比，利用分子生物学层次的手段，可克服因性腺未发育成熟或无明显第二性征等无法鉴别雌雄的问题；与利用组织学切片方法鉴别雌雄的技术相比，本发明方法可明显增加检测时效，并降低检测成本。本方法是对当前虾虎鱼科鱼类性别鉴别技术的重大提升和补充。

附图说明：

图1是性别鉴定电泳图(1～3为9月龄雌鱼；4～6为9月龄雄鱼；7～9为12月龄雌鱼；10～12为12月龄雄鱼；13～15为24月龄雌鱼；16～18为24月龄雄鱼)；

图2是性别鉴定电泳图(P为阳性对照，N为阴性对照，C1～C10为封闭群，W1～W10为野生群)。

具体实施方式：