[发明专利]一种半定量测定DNA中RNA含量的SEC-HPLC检测方法

权利要求书

1.一种半定量测定DNA中RNA百分含量的SEC-HPLC方法，包括下列步骤：

a)配制分析溶液

用纯水稀释标准品和样品，制成分析溶液；

b)色谱条件

色谱柱为尺寸排阻色谱柱；

以磷酸钠盐-氯化钠的混合液为流动相，流动相pH范围7～8；采用等梯度洗脱方法，流速为0.3-0.6ml/min；柱温为20-30℃；检测波长为260nm；

c)上机测定

取步骤a)制成的分析溶液12-50μl注入高效液相色谱仪，进行色谱分析，并记录色谱图。

2.根据权利要求1所述的SEC-HPLC方法，其特征在于：所述纯水为分子生物级别。

3.根据权利要求1所述的SEC-HPLC方法，其特征在于：所述尺寸排阻色谱柱的规格为：柱长介于300mm-340mm之间，色谱柱内径介于5mm-10mm之间，粒径介于7-13μm之间，孔径介于20-200nm之间。

4.根据权利要求3所述的SEC-HPLC方法，其特征在于：所述尺寸排阻色谱柱为TSK5000PWXL，柱长30cm，内径7.8mm，粒径10μm的聚甲基丙烯酸酯色谱柱。

5.根据权利要求1所述的SEC-HPLC方法，其特征在于：所述磷酸钠盐-氯化钠混合溶液，磷酸钠盐的浓度为0.04-0.06mol/L，氯化钠溶液浓度为0.1-0.3mol/L，pH 7～8。

6.根据权利要求5所述的SEC-HPLC方法，其特征在于：所述磷酸钠盐-氯化钠混合溶液，磷酸钠盐浓度为0.05mol/L，氯化钠溶液浓度为0.2mol/L，pH7.4。

7.根据权利要求4-6任一项所述的SEC-HPLC方法，其特征在于：所述磷酸钠盐选自磷酸二氢钠或磷酸氢二钠的一种或几种。

8.根据权利要求1所述的SEC-HPLC方法，其特征在于：所述尺寸排阻色谱柱为聚甲基丙烯酸酯色谱柱，所述流动相为磷酸钠盐溶液与氯化钠混合溶液，磷酸钠盐溶液0.05mol/L，氯化钠溶液0.2mol/L，所述流动相进行等梯度洗脱。

9.根据权利要求1所述的SEC-HPLC方法，其特征在于：所述样品为生物实验用DNA样品或药用DNA样品。