[发明专利]猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量PCR引物组及试剂盒

说明书

本发明通过建立一种猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量PCR引物组及试剂盒，该发明属于病毒分子生物学检测领域。该方法可快速检测猫传染性腹膜炎病毒。该方法简单快速，对单个样本检测时间为90分钟，其灵敏度可达10拷贝数/ul，针对较大的样本量可做到同时检测，具有良好的灵敏性、重复性、特异性以及稳定性，可实现对猫传染性腹膜炎病毒快速准确检测的目的。

技术领域

本发明涉及一种病毒检测引物组，含有该引物组的试剂盒及其应用，特别涉及一种用于猫传染性腹膜炎病毒检测的引物组，含有该引物组的试剂盒及其应用。本发明属于病毒检测技术领域。

背景技术

猫传染性腹膜炎(Feline infectious peritonitis，FIP)主要是由猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus，FIPV)引起的家猫和野生猫科动物的渐近线、致死性疾病，主要表现为腹膜炎、大量渗出型腹水聚集或各种脏器出现肉芽肿病变的临床特征，危害及其严重，是影响养猫业及其相关产业发展的主要病毒性传染病之一。

目前国内主要通过临床诊断来对猫传染性腹膜炎进行诊断，临床诊断方法主要包括病理学检查、血清学检测和RT-PCR检测等。但是仅仅通过临床症状进行诊断的方法需要依赖于临床症状的表现以及诊断者的经验，而患猫传染性腹膜炎的猫初期症状不明显，病程进展有较大差异，导致获得的结果容易不准确，往往因误诊而贻误治疗最终导致病猫死亡。现有的常规方法是抽取腹腔液提取后进行检测，这种方法本身的敏感性极低，而同时由于FIPV在腹腔液中含量极少，非常容易导致漏检，从而不能准确检测出FIPV。

因此，急需建立一种诊断猫传染性腹膜炎病毒的高特异性的检测方法。

发明内容

本发明旨在提供一种实时荧光定量PCR检测猫传染性腹膜炎病毒的引物组。

本发明采取的技术方案是：

一种猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量PCR引物组，包括FIPV Fwd：5’-ATTGATGGAGTCTTCTGGGTTGC-3’(SEQ ID No.1)和FIPV Rev：5’-TGAGTTGTTCCTAGATCGGTTCG-3’(SEQ ID No.2)。所述引物是根据GenBank上公布的FIPV的N基因全基因组序列(登录号：DQ010921)的保守区序列所设计的。

本发明的引物组可以用于制备猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒，从而对猫传染性腹膜炎病毒进行病毒含量的检测。该试剂盒包括阳性对照标准品、PCR反应液和阴性对照；所述阳性对照标准品为含有猫传染性腹膜炎病毒N基因序列的重组质粒FIPV-N-pET-28a；所述PCR反应液包括提取的模板cDNA，如前所述的引物组，SYBR-Green荧光染料，ddH₂O。

用本发明的引物组制备的猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒，检测方法简便快捷，重复性好，敏感性高，特异性强，可以对猫传染性腹膜炎病毒进行快速的、高敏感的实时荧光定量PCR检测。

附图说明

图1是荧光定量PCR标准曲线；

图2是荧光定量PCR扩增产物的溶解曲线；

图3是荧光定量PCR特异性实验图，其中标号1为阳性标准品，2-8分别为阴性对照，猪流行性腹泻病毒，猪圆环病毒2型，猪细小病毒7型，猪传染性胃肠炎病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒；

图4是连续10个稀释度标准样品的灵敏性实验扩增曲线图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式结合附图对本发明做进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。