[发明专利]一种新型的钠钾ATP酶的检测方法

权利要求书

1.一种新型的钠钾ATP酶的检测方法，其包括以下步骤：

(1)将细胞按适宜的方法培养、加RbCl溶液、裂解、测蛋白、消化、赶酸、制备供试品溶液。

(2)以铷Rb单元素标准溶液为标准品，以钇Y单元素标准溶液为内标，采用电感耦合等离子体质谱法检测Rb⁺的摄入量。

2.根据权利要求1所述的新型的钠钾ATP酶的检测方法，其特征在于，所述的步骤1细胞培养及处理方法如下：氯化铷用含钙、镁Hank's溶液溶解稀释；将正常培养的细胞接种到孔板中，并至细胞覆盖约70－80％的板底时，对照组直接加入含RbCl的Hank's溶液，给药组加入药物处理细胞后再加入含RbCl的Hank's溶液；在培养箱中培养后，吸净含RbCl的Hank's溶液，用无RbCl的Hank's溶液洗涤细胞，裂解细胞，二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白质浓度；另加入浓硝酸和内标Y在室温下消化细胞，消化完成后再加入H₂O₂赶酸直至棕色气体消失，最后用超纯水将溶液定容到适宜的体积。

3.根据权利要求1所述的新型的钠钾ATP酶的检测方法，其特征在于，步骤1：将正常培养的细胞调整为4×10⁵－5×10⁵个/mL，接种到孔板中；在细胞覆盖约70－80％的板底时，加入药物处理细胞24h后再加入含RbCl的Hank's溶液1mL；在培养箱中培养2h后，将含RbCl的Hank's溶液溶液吸净，用无RbCl的Hank's溶液洗涤细胞3次；随后，用裂解液裂解细胞，用BCA测定蛋白质浓度，另加入浓硝酸1mL和使终浓度达到20μg/L的内标Y在室温下消化细胞2h；消化完成后，加入250μLH₂O₂在100℃下赶酸2h，直到棕色气体消失，最后用超纯水将溶液定容至40mL。

4.根据权利要求1所述的新型的钠钾ATP酶的检测方法，其特征在于，步骤2：以铷(Rb)单元素标准溶液。其制备方法为用2.5％HNO₃水溶液(v/v)溶解稀释至12.5－1000μg/L浓度作为标准品溶液；以钇(Y)单元素标准溶液用2.5％HNO₃水溶液(v/v)溶解稀释至8mg/L浓度作为内标母液。

5.根据权利要求1所述的新型的钠钾ATP酶的检测方法，其特征在于，所述的步骤2电感耦合等离子体质谱法的参数为：射频功率、冷却气流量、辅助气流量、雾化器流量、采样深度、蠕动泵转速、扫描方式、扫描次数、重复采样次数；RF射频功率1100W，冷却气流量15L/min，辅助气流量1.2L/min，雾化器流量0.99L/min，采样深度7.0mm，蠕动泵转速24r/min，扫描方式单点跳峰，扫描次数20次，重复采样3次。

6.根据权利要求1所述的新型的钠钾ATP酶的检测方法，其特征在于，所述的步骤2的特征在于：采用电感耦合等离子体质谱法进行样品检测，其方法是根据标准曲线计算Rb⁺含量，并除以蛋白质浓度，得到每克蛋白质的Rb⁺转运浓度作为最终结果。