[发明专利]一种基于荧光共振能量转移检测生物硫醇的近红外比率荧光探针及其制备和应用

权利要求书

1.一种基于荧光共振能量转移检测生物硫醇的近红外比率荧光探针，其特征在于，荧光探针的结构式如下：

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2.一种如权利要求1所述的近红外比率荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将氧杂蒽染料1与肌氨酸叔丁酯盐酸盐和卡特缩合剂进行酰胺偶联反应，反应结束后经过后处理得到化合物2；

（2）将氟硼二吡咯3与盐酸胱胺在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基丁二酰亚胺进行酰胺偶联反应，反应结束后经过后处理得到化合物4：

（3）步骤（1）得的化合物2在二氯甲烷中酸化后，再与步骤（2）得到的化合物4在EDCI和NHS试剂进行酰胺偶联反应，反应结束后经过后处理得到近红外比率荧光探针；

所述氧杂蒽染料1、化合物2、氟硼二吡咯3和化合物4的结构式如下：

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3.一种如权利要求1所述的近红外比率荧光探针在生物硫醇检测和成像方面的应用，所述应用是非疾病诊断/治疗的；

其特征在于，所述的生物硫醇为半胱氨酸、同型半胱氨酸或谷胱甘肽。

4.根据权利要求3所述的近红外比率荧光探针在生物硫醇检测和成像方面的应用，其特征在于，所述的荧光探针用于生物硫醇的定性检测，具体方法如下：

将所述的荧光探针配置成测试溶液，然后加入待测样品，在488nm激发下，测定512nm和656nm处荧光发射强度变化，若512nm处荧光强度变强，656nm处荧光强度变弱，则确定待测样品中含有生物硫醇。

5.根据权利要求3所述的近红外比率荧光探针在生物硫醇检测和成像方面的应用，其特征在于，所述的荧光探针用于生物硫醇的定量检测，具体方法如下：

（1）将所述的荧光探针配置成测试溶液，然后加入待测样品，在488nm激发下，测定512nm和656nm处荧光发射强度；

（2）计算得到荧光强度比值F_512nm/F_656nm，根据荧光强度比值F_512nm/F_656nm得到待测样品中的生物硫醇的含量。

6.根据权利要求5所述的近红外比率荧光探针在生物硫醇检测和成像方面的应用，其特征在于，所述测试溶液的配制方法如下：

将所述荧光探针加入到EtOH/PBS溶液中，配置成浓度为5 μmol/L的测试溶液。

7.根据权利要求3所述的近红外比率荧光探针在生物硫醇检测和成像方面的应用，其特征在于，所述的荧光探针用于细胞内荧光成像测试，具体方法如下：将待测细胞用含有荧光探针的溶液进行孵化，然后PBS洗涤三次，进行共聚焦细胞成像检测；

共聚焦细胞成像检测时，激发波长为488nm，绿色通道收集波长为500-550nm，红色通道收集波长为630-680nm。