[发明专利]检测血清外泌体circ-KCNQ1的引物、试剂盒及其在胃癌肝转移中的应用

说明书

本发明涉及血清外泌体中circ‑KCNQ1的检测引物、检测试剂盒及其应用，检测试剂盒包括血清外泌体样本的RNA提取试剂、引物、去基因组DNA反应体系、逆转录反应体系、qPCR操作反应体系。本发明公开了外泌体circ‑KCNQ1在胃癌患者及正常人血清外泌体中的表达情况，并用荧光定量PCR检测circ‑KCNQ1。血清外泌体circ‑KCNQ1可用于胃癌肝转移早期诊断，判断疾病进展和预后情况，并可评价胃癌肝转移的治疗效果。

技术领域

本发明涉及检测血清外泌体circ-KCNQ1的引物、试剂盒及其在胃癌肝转移中的应用，属于分子诊断技术领域。

背景技术

胃癌严重威胁着人类的健康,是全球五大癌症之一,世界卫生组织(world healthorganization,WHO)统计报告显示,2012年全球胃癌新发病约95.1万例,死亡约72.3万例。在东亚(特别是中国、韩国、蒙古和日本)、中欧、东欧、南美洲以及非洲大部分地区的胃癌发病率较高。中国是全世界胃癌发病率和死亡率最高的国家。全国肿瘤登记中心(NationalCentral Cancer Registry of China,NC胃癌)数据显示,2015年在中国胃癌新发病约67.9万例,死亡约49.8万例,均高居我国恶性肿瘤第二位。早期胃癌难以诊断,病人在就诊时大多处于中晚期,中晚期胃癌常常发生侵袭和转移,严重影响胃癌患者的治疗,五年生存率低于30％。肝脏是胃癌转移的主要靶器官,肝转移发生率高达44％,发生胃癌肝转移(gastriccancer with liver metastasis,GCLM)的患者中可实行切除手术的极为有限,治疗难度较大,胃癌肝转移患者五年生存率仅10％左右。

胃癌易发生肝转移,与肝脏的生物学特点密不可分。肝脏是人体最大的腺器,受肝门静脉和肝动脉双重血液供应,其中,肝门静脉占80％,肝动脉占20％,消化道器官的血液均经肝门静脉回流,肝脏具有丰富的血流量。肝毛细血管是多孔的血窦状结构,具有很强的通透性,且肝窦导管缺乏皮下基底膜,与脑、肺和骨等其他器官相比,肿瘤细胞更加容易在肝脏发生外渗,所以肝脏是消化道肿瘤转移最主要的器官。胃癌、结直肠癌及胰腺癌等均会通过血管转移和淋巴回流等途径首先转移到肝脏。肝脏丰富的血管系统为肿瘤细胞的生长提供了充足的营养物质。除了血液循环系统的作用,胃癌细胞也容易与肝窦内皮细胞(hepatic sinusoidal endothelial cells,HSEC)黏附。肝毛细血管可使大量的肿瘤细胞阻滞,肿瘤细胞与血管内皮细胞相互作用后,分泌细胞因子使血管内皮细胞收缩,促进肿瘤细胞侵出血管,以利于肿瘤细胞定植到肝实质组织中。

目前对胃癌肝转移早期诊断仍是一大难题。已有一些肿瘤分子标志物应用于临床早期检测和辅助诊断,如癌胚抗原CEA、CA199、CA125、AFP等,但特异性仍较低。因此，发现新的调控胃癌细胞肝转移的肿瘤相关基因，不但有助于深入了解胃癌肝转移发生发展的分子机制，补充和完善现有的细胞癌变理论体系，而且有助于鉴定新的胃癌肝转移特异的生物标志物和药物靶点，为胃癌肝转移的预防、诊断、治疗提供重要的理论依据。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种检测血清外泌体circ-KCNQ1的引物、试剂盒及其应用，circ-KCNQ1可用于胃癌肝转移早期诊断，判断疾病进展和预后情况，并可评价胃癌肝转移的治疗效果。

为解决上述技术问题，本发明提供一种血清外泌体circ-KCNQ1，所述circ-KCNQ1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提供一种上述的血清外泌体circ-KCNQ1的检测引物，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。

本发明还提供一种血清外泌体circ-KCNQ1检测试剂盒，包括上述的检测引物。

进一步地，还包括血清外泌体的RNA提取试剂、去基因组DNA反应体系、逆转录反应体系、qPCR反应体系。