[发明专利]猪伪狂犬病病毒毒株及其应用

说明书

本发明公开了一种猪伪狂犬病病毒毒株及其应用。本发明提供的猪伪狂犬病病毒WH‑13株于2013年在湖北武汉某发病猪场分离，经鉴定，该毒株是一株毒力较强的流行毒株。将猪伪狂犬病病毒WH‑13株制备成灭活疫苗，仔猪免疫1次(2ml)，血清中和抗体水平不低于1:128，保护期长达6个月。采用基因工程方法将该毒株缺失TK、gE、gI基因，制成猪伪狂犬病活疫苗仔猪最小免疫剂量为10^3.0TCID₅₀，仔猪免疫1次血清中和抗体水平不低于1:145，对经典毒株和流行毒株的免疫保护率均为100％，保护期长达6个月。猪伪狂犬病病毒WH‑13株的保藏编号为：CCTCC NO:V202032。

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及一种猪伪狂犬病病毒毒株及其应用。猪伪狂犬病灭活疫苗和猪伪狂犬病减毒活疫苗的制备方法。

背景技术

伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus，PRV)属疱诊病毒科疱疹病毒甲亚科，水痘病毒属。猪伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的高度接触性传染病，猪的主要症状有发热、脑脊髓炎和繁殖障碍等症状。1813年该病最早发现于美国，随后在很多养猪国家均有发生，主要出现于南美洲、亚洲和欧洲等猪群密集地区，目前已呈世界性分布，流行呈现日益上升趋势，被世界动物卫生组织(OIE)列入需申报的疾病名录(OIE listed diseases)，是我国法定二类动物疫病。

猪伪狂犬病是当今危害全球养猪业最严重的传染病之一，一旦发生很难进行根除，该病在我国广泛存在，给我国养猪业造成巨大的经济损失。目前，对该病的防控，国内外均以疫苗免疫预防为主，结合伪狂犬病毒gE抗原和gE抗体检测淘汰、净化野毒感染猪。

2011年以前，为了预防猪伪狂犬病，一般广泛使用含标记基因gE缺失的Barthr-K61株活疫苗，应用效果较好，大体控制住了伪狂犬病。2011年，伪狂犬病再次爆发，据相关学者报道，这次爆发是由伪狂犬病病毒变异引起的；据学者研究表明，新出现的PRV变异毒株与经典毒株有着不同的抗原性，会引起35日龄以上的猪产生神经症状，并出现死亡，而目前市面上的Barthr-K61株疫苗并不能完全保护2011年以后分离的这些PRV野毒株。因此，需要采用国内2011年以后分离的流行毒株制备的灭活疫苗或基因缺失减毒活疫苗来预防猪伪狂犬病经典毒株和流行毒株。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的就是提供一种猪伪狂犬病病毒毒株及其应用，充分利用该毒株制备疫苗后的安全、有效、质量可控等优势，为我国伪狂犬病的防控做出一定的贡献。

本发明提供的猪伪狂犬病病毒，分类命名：疱疹病毒科猪疱疹病毒I型猪伪狂犬病病毒WH-13株；保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)；保藏时间：2020年6月2日；保藏编号：CCTCC NO:V202032；保藏单位地址：湖北省武汉市武昌区珞珈山路16号武汉大学。

上述的猪伪狂犬病病毒WH-13株于2013年在湖北武汉某发病猪场分离，经鉴定，该毒株在鸡胚成纤维细胞(CEF)、Vero细胞、猪睾丸细胞(ST)、PK-15细胞、BHK-21细胞上均能出现典型细胞病变；能被伪狂犬病特异性阳性血清中和；在电镜下能看到伪狂犬病病毒粒子。确定该病毒为猪伪狂犬病病毒，命名为WH-13株。

猪伪狂犬病病毒WH-13株能致死小鼠和家兔，能使8～9周龄仔猪5/5发病，并出现死亡。

猪伪狂犬病病毒WH-13株进化分析，各毒力基因进化树上与早期分离毒株亲缘关系较远，而与2011年后中国各分离流行毒株亲缘关系较近。

本发明的猪伪狂犬病病毒用于制备疫苗。

相较于现有技术，本发明的优点及有益效果如下：