[发明专利]从血液中无标记分离循环肿瘤细胞的惯性聚焦微流控芯片

权利要求书

1.一种惯性聚焦微流控芯片，其特征在于，所述惯性聚焦微流控芯片依次包括输入端、之字形通道、具有自放大功能的直通道和输出端，所述输入端位于所述之字形通道的入口，所述之字形通道的出口与所述具有自放大功能的直通道的入口无缝连接，所述输出端位于所述具有自放大功能的直通道的出口，所述之字形通道的直径为0.03~0.05 mm，所述具有自放大功能的直通道的直径为0.8~1.65 mm，所述具有自放大功能的直通道有两个，第一直通道的直径为0.8~0.85 mm，第二直通道的直径为1.60~1.65 mm，所述第二直通道接近输出端，所述第一直通道接近输入端，所述输入端有1个输入管道，所述输出端含有3个输出管道，第一输出管道与所述直通道位于同一水平线上，第二输出管道和第三输出管道分别与所述第一输出管道有夹角。

2.如权利要求1所述的惯性聚焦微流控芯片，其中，所述惯性聚焦微流控芯片所用的制作材料为聚二甲基硅氧烷。

3.一种如权利要求1-2中任一项所述的惯性聚焦微流控芯片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、分别称取聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷固化剂，所述聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷固化剂的质量比为10:1，并且混匀得到混合胶体；

步骤2、将所述混合胶体放到连接双级旋片式真空泵的真空干燥皿内，抽真空以确保混合胶体中没有气泡；

步骤3、把抽完真空的混合胶体导入到放置有目标图案的硅片的培养皿内，使混合胶体覆盖硅片表面，继续抽真空，使硅片与培养皿底部之间没有气泡；

步骤4、将所述步骤3中的培养皿放到电热恒温干燥箱内，烘干；

步骤5、将所述步骤4的培养皿从电热恒温干燥箱内取出来，分离聚二甲基硅氧烷和硅片，并且将聚二甲基硅氧烷的有图案的部分切成方形，用针头在输入端和输出端处打孔；

步骤6、清理聚二甲基硅氧烷芯片和载玻片的表面，确保两者表面干净之后，将聚二甲基硅氧烷芯片和载玻片一并放到等离子清洗机内；

步骤7、打开等离子清洗机，时间设为50 s，开始抽真空，观察等离子清洗机所显示的腔内压强值，当压强降到200 pa时，停止继续抽真空，开辉光强度最高的开关，真空腔内出现偏紫色的辉光时，开始计时，取出聚二甲基硅氧烷芯片和载玻片之后，将二者粘在一起；

步骤8、将外径为0.8 mm的四氟乙烯管插入到输入端和输出端，为了避免在实验过程中入口和出口会有液体漏出的现象，用聚二甲基硅氧烷混合液对入口和出口处进行封口，再继续烘0.5 h。

4.权利要求3所述的惯性聚焦微流控芯片的制备方法，其中，步骤1中聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷固化剂的称取量分别为25 g和2.5 g。

5.如权利要求3所述的惯性聚焦微流控芯片的制备方法，其中，步骤3的抽真空时间为10~15 min。

6.如权利要求3所述的惯性聚焦微流控芯片的制备方法，其中，步骤4的电热恒温干燥箱内的温度为75℃，烘干45-60 min。

7.如权利要求3所述的惯性聚焦微流控芯片的制备方法，其中，步骤7中为了更好的粘合聚二甲基硅氧烷芯片和载玻片，把芯片放到烘箱内，75℃下烘0.5 h。

8.一种使用如权利要求1-2中任一项所述的惯性聚焦微流控芯片分离循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a、将血液样品进行常规的红细胞裂解、离心和去除上清液，得到实验品；

b、将所述实验品从惯性聚焦微流控芯片的输入端进入所述惯性聚焦微流控芯片，实验品依次经过之字形通道和两个具有自放大功能的直通道，流速为0.4 mL/min，分离时间为30~40 min；

c、循环肿瘤细胞从位于所述惯性聚焦微流控芯片的输出端的第二输出管道和第三输出管道输出并收集，白细胞从与具有自放大功能的直通道处于同一水平线的第一输出管道输出。