[发明专利]HIV-1病毒载量实时荧光定量PCR检测特异性引物对、试剂盒

说明书

本发明涉及生物分子检测领域，具体涉及HIV‑1病毒载量实时荧光定量PCR检测特异性引物对、试剂盒。本发明提供了精确、简便的用于人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV‑1)RNA定量检测的特异性引物对。利用一步法荧光定量RT‑PCR技术检测HIV‑1病毒载量。该操作既确保了扩增结果的准确性，灵敏度，又缩短了时间、减少了污染，提高了荧光定量PCR检测方法的简便性，可用于HIV‑1定量检测，并且作为临床对HIV‑1感染的辅助诊断方法和临床治疗效果的监测手段。

技术领域

本发明涉及生物分子检测领域，具体涉及HIV-1病毒载量实时荧光定量PCR检测特异性引物对、试剂盒。

背景技术

人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)是诱发人获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS)的主要病原体，在分类学上属于逆转录病毒科(Retroviridae)慢病毒属(Lentivirus)。根据基因型的不同，HIV可以分为两种类型：HIV-1与HIV-2。HIV-1有M、N、O、P四个不同的组(group)，每个组由独立跨物种传播所致。HIV-1具有较高的毒力，更容易传播的同时也导致了全球绝大多数HIV感染。

全球所有HIV-1感染中，C亚型占46.6％。B亚型导致12.1％的感染，其次是A亚型、CRF02_AG、CRF01_AE、G亚型、D亚型。F、H、J、K亚型合计占感染的0.9％。其他流行重组类型(CRFs)占3.7％。

HIV-1感染后病毒载量的变化与艾滋病的发病进程有密切的相关性，HIV-1病毒载量的检测可以预测艾滋病发生、发展以及预后。抗HIV-1病毒药物的作用主要是抑制病毒的复制，降低病毒载量，因此，抗HIV的药物若产生效果，感染者体内的病毒量就会下降。因此，病毒载量的检测对疾病的监控、预防母婴传播以及观察抗病毒药物的疗效都具有重要的意义。

核酸检测已经成为了HIV实验室诊断的发展方向，最近几年核酸检测技术发展迅速，主要是采用各种扩增放大技术提高检测的灵敏度。随着扩增技术的成熟，可以将低拷贝的靶序列成对数级放大扩增，同时采用比放射性探针更灵敏的非放射性检测系统(如电化学发光系统等)，明显提高核酸检测的灵敏度，并减少放射性物质的污染，基于SYBR GreenⅠ荧光染色技术的荧光定量RT-PCR方法已发展成为成熟、常用而有效的检测手段。

SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料，并不与单链DNA链结合。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，在PCR体系中，随着特异性PCR产物的指数扩增，每个循环的延伸阶段，染料掺入双链DNA中，其荧光信号强度与PCR产物的数量呈正相关，可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。SYBR Green I的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。SYBR Green I荧光染料法的优点有：可用于监测任何双链DNA序列的扩增。信噪比高，样品荧光信号强，背景信号低；使用方便，不影响其它修饰酶作用；价格便宜，无需探针，降低了检测的设置和运行成本。

虽然HIV-1病毒各亚型的序列已公开，但是针对于个体感染人，序列的变化还是非常大的，因此仅基于已经公开的数据资料获得的HIV-1病毒的保守序列所设计的引物难以广泛适用，尤其不适于检测中国特有的HIV-1感染者。

发明内容

为了解决上述问题提出并完成本发明。

本申请的目的是提供HIV-1病毒载量实时荧光定量PCR检测特异性引物对。

本发明的再一目的是提供HIV-1病毒载量实时荧光定量PCR检测试剂盒。

本发明实施例提供了HIV-1病毒载量实时荧光定量PCR检测特异性引物对，所述引物对包括引物对1和引物对2，其中，