[发明专利]利用新型Cas酶进行目标核酸检测的方法和系统

权利要求书

1.一种非疾病诊断目的的利用新型Cas酶检测目标核酸中是否存在待检测的特征序列的方法，所述方法包括：

(1)提供目标核酸、核酸外切酶、gRNA、Cas蛋白和单链核酸检测器；

(2)所述核酸外切酶用于消化所述目标核酸以形成含有至少部分单链核酸的核酸序列；

(3)所述gRNA能够靶向待检测的特征序列，所述Cas蛋白在所述gRNA的作用下识别所述待检测的特征序列，所述Cas蛋白识别所述待检测的特征序列后激发对单链核酸检测器的切割活性；

(4)所述Cas蛋白切割所述单链核酸检测器，所述单链核酸检测器被Cas蛋白切割后与所述单链核酸检测器被Cas蛋白切割前相比表现出可检测的区别；

(5)测试是否能够检测出步骤(4)所述的可检测的区别；如果能够检测出步骤(4)所述的可检测的区别，则反映目标核酸中含有待检测的特征序列；或者，如果无法检测出步骤(4)所述的可检测的区别，则反映目标核酸中不含有待检测的特征序列；

所述Cas蛋白选自Cas12i、Cas12j中的一种或其组合；

所述核酸外切酶为5’→3’核酸外切酶。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸外切酶选自T5核酸外切酶、T7核酸外切酶或λ核酸外切酶中的一种或任意几种。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述可检测的区别通过以下方式检测：基于视觉的检测，基于传感器的检测，基于金纳米颗粒的检测或荧光偏振。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述可检测的区别通过以下方式检测：颜色检测，电化学检测或基于半导体的检测。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述可检测的区别通过以下方式检测：基于视觉的检测，基于传感器的检测，基于金纳米颗粒的检测或荧光偏振。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述可检测的区别通过以下方式检测：颜色检测，电化学检测或基于半导体的检测。

7.一种利用新型Cas酶检测目标核酸中是否存在待检测的特征序列的系统，所述系统包括权利要求1、3、4任一权利要求中所述的核酸外切酶、gRNA、Cas蛋白和单链核酸检测器。

8.一种利用新型Cas酶检测目标核酸中是否存在待检测的特征序列的系统，所述系统包括权利要求2、5、6任一权利要求中所述的核酸外切酶、gRNA、Cas蛋白和单链核酸检测器。

9.一种检测目标核酸中是否存在待检测的特征序列的系统，所述系统包括检测装置、反应体系和检测剂，其特征在于，

所述反应体系包括权利要求1、3、4任一权利要求中所述的核酸外切酶、gRNA、Cas蛋白和单链核酸检测器；

所述单链核酸检测器的一端连接有第一标记分子，另一端连接有第二标记分子；

所述检测剂连接有第一结合分子，所述第一结合分子能够与第一标记分子结合；

所述检测装置设置有第一检测线和第二检测线，所述第一检测线设置有可以捕获第一结合分子的第一物质，所述第二检测线设置有可以捕获第二标记分子的第二物质。

10.一种检测目标核酸中是否存在待检测的特征序列的系统，所述系统包括检测装置、反应体系和检测剂，其特征在于，

所述反应体系包括权利要求2、5、6任一权利要求中所述的核酸外切酶、gRNA、Cas蛋白和单链核酸检测器；

所述单链核酸检测器的一端连接有第一标记分子，另一端连接有第二标记分子；

所述检测剂连接有第一结合分子，所述第一结合分子能够与第一标记分子结合；

所述检测装置设置有第一检测线和第二检测线，所述第一检测线设置有可以捕获第一结合分子的第一物质，所述第二检测线设置有可以捕获第二标记分子的第二物质。