[发明专利]一种双层微流控芯片、包含该芯片的乳腺癌miRNA检测试剂盒及制备方法、检测方法

权利要求书

1.一种双层微流控芯片，其特征在于：包括上层的阀门控制层、中间的流道层和功能化基底，所述流道层设有微腔、与所述微腔连接的微流道、以及进样口和出样口；所述的阀门控制层包括控制阀、与所述控制阀连接的阀门进样口；所述功能化基底分为检测区和反应区，所述检测区与所述微腔对应，所述反应区与所述微流道对应。

2.根据权利要求1所述的双层微流控芯片，其特征在于：所述的反应区修饰有纳米氧化石墨烯或纳米石墨烯材料，检测区修饰多聚赖氨酸。

3.根据权利要求2所述的双层微流控芯片，其特征在于：所述的反应区固定有检测探针。

4.根据权利要求3所述的双层微流控芯片，其特征在于：所述控制阀包括微腔控制阀和微流道控制阀，所述微腔控制阀设置在所述微腔的入口处，所述的微流道控制阀设置在所述微流道和出样口之间。

5.一种乳腺癌miRNA检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括1-4任一项所述的双层微流控芯片、乳腺癌miRNA标准品和荧光标记的miRNA探针。

6.根据权利要求5所述的乳腺癌miRNA检测试剂盒，其特征在于： 所述的乳腺癌miRNA标准品分别是以乳腺癌标志物miR-125、miR-126、miR-155、miR-191、miR-21为模板合成的产物。

7.根据权利要求6所述的根据权利要求5所述的乳腺癌miRNA检测试剂盒，其特征在于：还包括稀释试剂，所述的稀释试剂包括1M TE Buffer和RNA保护液，用于对乳腺癌miRNA标准品或探针进行稀释。

8.一种乳腺癌miRNA检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：

双层微流控芯片的制备；

乳腺癌miRNA标准品的合成；

荧光探针的合成。

9.根据权利要求8所述的乳腺癌miRNA检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述的双层微流控芯片的制备步骤为：

（1）采用RTV 615A和RTV 615 B两种试剂，分别制备阀门控制层和流道层；

（2）制备功能化基底；

（3）将阀门控制层和流道层合并，然后与功能化基底键合；

（4）在功能化基底的反应区铺设荧光探针。

10.一种乳腺癌miRNA检测的检测方法，其特征在于，包括：

（1）将乳腺癌miRNA标准品稀释成梯度浓度，分别将各浓度的miRNA标准品溶液，注入到已经铺设荧光探针的双层微流控芯片的进样口，采用氮气从进样口将其吹入到微流道内；

（2）在微流道内孵育20-30 min；采用氮气从进样口将微流道内液体吹入到微腔中，并采用冲洗试剂对微流道进行冲洗，将其冲入到微腔中；

（3）液体在微腔内孵育10-15 min；

（4）然后将芯片整体浸在3% BSA中，并将基底上面的双层PDMS揭掉，基底浸泡10-15min进行封闭；

（5）封闭后的基底依次用100% PBS、50% PBS、超纯水浸泡，吹干进行荧光检测；

（6）将不同浓度和荧光值的对数进行线性拟合，制作标准曲线；

（7）对待测样本中miRNA进行荧光检测，根据标准曲线，将测量的荧光值带入，得到待测样本中miRNA的含量。