[发明专利]一种特异抑制OLFM4基因表达的siRNA及其应用

说明书

本发明公开了一种特异抑制OLFM4基因表达的siRNA及其应用，特异抑制OLFM4基因表达的siRNA为由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示核苷酸序列组成的双链RNA；体外试验结果表明，本发明提供的RNA可以特异高效地抑制OLFM4基因表达，促进脂滴和甘油三酯的沉积，可构建NAFLD体外模型。本发明可以应用于非酒精性脂肪性肝病的发病机制和潜在治疗方法的研究。本发明具有重要价值。

技术领域

本发明涉及一种特异抑制OLFM4基因表达的siRNA及其应用。

背景技术

小干扰RNA(Small interfering RNA；siRNA)又称短干扰RNA(short interferingRNA)或沉默RNA(silencing RNA)，是一种长20-25个核苷酸的双股RNA。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)现象是一种进化上保守的用于抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制。与靶基因转录产物mRNA存在同源互补序列的内源性或外源性双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)在细胞内特异降解该mRNA，从而实现特异性基因封闭，是一种序列特异性的转录后基因沉默。RNAi技术已广泛应用于多种生物基因功能的研究。针对目的基因构建siRNA，利用RNAi技术封闭该基因的表达，根据现象的改变可以分析基因功能。相比于基因敲除技术的长实验周期及永久性基因关闭，RNAi技术则可在短期内可控性地关闭10个基因，因此RNAi技术可以较灵活、快速得用于生物实验研究。siRNA经过化学修饰可以使其免受酶解，具有更良好的靶基因沉默效率、细胞穿透能力、热力学稳定性以及药物代谢学特征。RNAi技术已经广泛运用于疾病发病机制的研究。

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指除外酒精和其他明确肝损因素所致的以肝细胞脂肪变性和脂质贮积为特征的临床病理综合征。近年来，随着人们生活习惯和饮食结构的改变，我国成人NAFLD患病率快速增长，已高达29.2％，西方一些发达国家更是高于30％，已成为临床最常见的慢性肝病。根据病理学改变及临床表现，可将NAFLD的自然病程分为单纯性NAFLD和非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)。单纯性脂肪肝是一种良性疾病，而NASH却可以逐渐向肝硬化、肝癌等终末期肝病进展。脂变肝脏对很多药物和毒物的敏感性增加，增加了临床用药风险；再者，NAFLD可通过加剧机体代谢紊乱与2型糖尿病、冠心病、慢性肾脏疾病、肝外恶性肿瘤等疾病的高发密切相关，可能导致严重的临床后果。NAFLD发生发展的分子机制至今尚未明确，其治疗也缺乏特别有效方法。因此，加强NAFLD的相关研究，尤其是NAFLD发病机制的研究对推动NAFLD的防治工作有着重要的意义。

嗅质蛋白4(olfactomedin4，OLFM4，又称GW112或hGC-1)是一种具有多种生物学功能的糖蛋白，属于嗅质蛋白家族，该家族在C端特异性存在一个含有约250个氨基酸的嗅质蛋白结构域。OLFM4最初是在人造血髓细胞中用粒细胞集落刺激因子处理克隆得到，位于13q14.3号染色体上，编码了一个510个氨基酸的糖蛋白，其分子量为72kDa。OLMF4可在细胞膜、细胞质、细胞核、线粒体和成熟的中性粒细胞颗粒中表达。OLFM4的表达具有组织器官特异性，在消化道中表达相对较高，在胃、骨髓中有中度表达，在其他组织中表达较弱或不表达。OLFM4在炎症性肠病肠黏膜上皮细胞及胃癌等消化系统肿瘤组织中表达进一步升高，参与自身免疫调节以及肿瘤细胞周期与凋亡调控。目前尚未有研究报道OLFM4与非酒精性脂肪肝关系，本技术方案首次提出OLFM4可能与NAFLD相关，并通过预实验发现OLFM4的表达水平在NAFLD的细胞模型中显著上调，提示了OLFM4在NAFLD中的潜在调节作用。采用RNAi技术进行OLFM4在NAFLD发病中机制的研究是对NAFLD发病机制的重要补充，对揭示OLFM4在NAFLD中的潜在发病机制有重要意义，有助于启发后续研究从全新的角度解决NAFLD的治疗难题，具有重要的临床、科研意义和巨大的社会经济效益。

发明内容