[发明专利]一种番茄抗病毒突变体的筛选方法

说明书

本发明涉及一种番茄抗病毒突变体的筛选方法，步骤如下：⑴番茄带病毒无菌苗的获取；⑵番茄愈伤组织的诱导；⑶将番茄愈伤组织分割成小块，转接到再生培养基中，再添加一定的渗透压逆境，培养条件为24h光照，光照强度2000Lx，培养温度23±1℃，并通过再生芽生长状况，初步筛选抗病毒再生芽，再经病毒检测，即得番茄抗病毒突变体。本发明方法通过组织培养技术，在离体条件下，通过逆境筛选，使得组织中某些抗病毒细胞的竞争优势，筛选出番茄抗病毒突变细胞系，再经过离体再生技术获得抗病毒植物，从而为番茄抗病毒育种提供良好的抗性种质资源。同时，也可为其他植物抗病毒育种提供一定的参考。

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，尤其是一种番茄抗病毒突变体的筛选方法。

背景技术

植物病毒是造成多种农作物减产和品质下降的重要病原之一,严重时甚至造成绝产，给农林业生产带来巨大损失，被称为植物的“癌症”。由于病毒种类繁多，传播途径广泛，又是胞内寄生，植物病毒病的防治非常困难。一般化学药物很难破坏病毒结构，目前尚未发现某一种农药能够一次根治植物病毒病。

目前，常规的抗病毒育种工作量大、育种周期长、缺乏抗病毒种质资源，不易获得稳定遗传的抗性基因，且存在远缘杂交不亲和等问题。

在番茄的基因库中很难找到相应的抗病毒种质资源，因此，不能通过杂交育种方法进行抗病毒品种培育，虽然目前一些研究通过转基因的手段可以解决某些植物病的问题，但由于试验方法的局限，不能获得具备普遍性的抗病毒效果。同时转基因植物品种在释放应用上还存在一定的问题，因此这一技术也没有广泛应用。

植物组织脱毒培养虽可获得番茄脱毒苗，是目前脱除植物体内病毒的一种有效手段，但脱毒不等于抗病毒。番茄脱毒苗不具有抗病毒能力，且植物组织脱毒培养费工费时，每次繁殖时都要重新进行脱毒培养，且在露地栽培过程中，会发生再次病毒感染现象，因此其在应用上也存在较大的局限性。

通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种番茄抗病毒突变体的筛选方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种番茄抗病毒突变体的筛选方法，步骤如下：

⑴番茄带病毒无菌苗的获取

选取带卷叶病毒番茄盆栽苗，剪取健壮的茎段，剪去叶片及叶柄，在超净环境中剪成带一个腋芽的茎段，70％乙醇浸泡30s，然后用含2.0％有效氯的次氯酸钠溶液消毒5min，无菌水冲洗5次，每次5min，冲洗后用无菌滤纸吸干外植体表面，并将茎段两端各剪去3mm，接种到MS培养基上进行腋芽萌发培养，培养条件为连续光照，光照强度2000Lx，培养温度25±1℃；

经过20d初代培养，将萌发的腋芽从基部剪切，接种到MS培养基上进行继代增殖培养，获得番茄组培苗，备用；

⑵番茄愈伤组织的诱导

取步骤⑴获得的番茄组培苗，剪取叶柄，接种到含愈伤组织诱导培养基上，进行愈伤组织诱导；

愈伤组织诱导培养基的配方为：MS+1.0～2.0mg·L^-16-苄氨基腺嘌呤/6-糠氨基嘌呤/玉米素+1.5～2.0mg·L^-12,4-D+30.0g·L^-1蔗糖，培养基pH为5.8，7g·L^-1琼脂粉固化；

培养条件为：24h光照，光照强度为1000Lx，培养温度为25±1℃；

⑶抗病毒再生芽的逆境筛选