[发明专利]用于多花黄精块茎基因表达分析的内参基因组合及其应用

说明书

本发明公开了用于不同发育时期多花黄精块茎基因表达分析的内参基因组合，由UBQ‑E2‑10基因和EF‑1α2基因组成，所述UBQ‑E2‑10内参基因序列如SEQ ID No.1所示，所述EF‑1α2内参基因序列如SEQ ID No.2所示。本发明首次提出了不同发育时期多花黄精块茎的内参基因组合，解决了现有不同发育时期多花黄精块茎的实时荧光定量PCR分析中缺乏内参基因的现状，相比使用单一的内参基因，本发明使用UBQ‑E2‑10和EF‑1α2基因的组合，得到的结果更准确可靠。

(一)技术领域

本发明涉及一组用于不同发育时期多花黄精块茎基因表达分析的内参基因组合及其应用。

(二)背景技术

黄精为百合科Liliaceae、黄精属Polygonatum Mill.多年生草本植物，全球有60余种，主要分布于北温带和北亚热带，我国有31种，广泛分布于除南方热带以外的广大地区。滇黄精P.kingianum Coll.et Hemsl.、黄精P.sibiricum Red.和多花黄精P.cyrtonemaHua.一同收录于《中国药典》(2015年版)，作为传统药食同源性中药材的原生药，黄精在抗衰老、调节免疫、调血脂、改善记忆力、抗肿瘤、抗菌等方面均显示出潜在的药用价值。随着。随着其分子生物学研究的不断深入和发展，基于实时荧光定量PCR(qPCR)的基因表达分析正逐渐应用于揭示多花黄精基因调控机理的研究。

在qPCR实验中，为了避免不同样本在RNA的产量、质量、逆转录效率以及扩增效率上可能存在的差别，通常利用内参基因进行数据校正和标准化，以减少样本之间的误差，因此选择合适的内参基因对数据进行校正是得到可靠数据的关键。

研究表明，UBQ-E2-10蛋白参与真核生物细胞的许多重要的生命活动，由泛素延伸蛋白介导的蛋白酶降解系统(ubiquitin/proteasome system，UPS)是真核生物体内最重要的蛋白降解途径，参与细胞周期调控、生长与凋亡、离子通道、DNA修复、信号传导、转录调控以及机体免疫等多种重要的生命活动过程。近年来的研究表明，高等植物泛素是一种高度保守的蛋白，泛素的保守位点对维持蛋白质结构和功能发挥关键作用。因为其高度的保守性和同源性，以及在不同组织器官中恒定的表达量，所以被用作多种高等植物中基因表达分析的内参基因，前人发现ubiquitin在拟南芥生长发育过程中都显示很高的表达稳定性；相关报道指出ubiquitin是研究多种植物(如葡萄，水稻，苁蓉，大豆等)不同发育时期基因表达最适的内参基因；此外，叶友杰等在筛选巴戟天内参基因时发现ubiquitin在不同组织中的表达最稳定；晋海军等认为ubiquitin是川续断根在不同时期(苗期和花期)中表达最稳定的内参基因。

EF-1α2是广泛存在于细胞内并且高度保守的蛋白，它在细胞中的含量仅次于肌动蛋白，此外，由于它在细胞中含量丰富和其它的细胞功能，是在翻译机制中研究的最多的部分，EF-1α2还与细胞生长及增殖速度相关，参与信号转导、与细胞结构结合、与细胞凋亡有关等。已有研究发现，EF-1α2在水稻的不同组织中、在中药材铁皮石斛中、在马铃薯中表达稳定性均很高；李娟等发现EF-1α2在远志不同生长年限和部位中表达最为稳定；荆礼等认为EF-1α2是山参在不同年限下最为稳定的内参基因。

但目前ubiquitin-conjugating enzyme E2 10(UBQ-E2-10)和elongationfactor 1-alpha isoform(EF-1α2)基因作为关于不同发育时期多花黄精块茎内参基因的研究还未见报道。而缺乏内参基因，则难以实现基因表达的校正和标准化，大大阻碍了多花黄精块茎内各种基因的表达特性及功能分析研究。

(三)发明内容

基于上述现有技术中存在的缺陷和市场的需求，本发明提供了一组用于不同发育时期多花黄精块茎基因表达分析的内参基因及其应用。

本发明采用的技术方案是：

用于不同发育时期多花黄精块茎基因表达分析的内参基因组合，由UBQ-E2-10基因和EF-1α2基因组成。