[发明专利]一种诺如病毒GI/GII抗原联合定量检测试剂盒及制备方法

说明书

本发明公开了一种诺如病毒GI/GII抗原联合定量检测试剂盒及制备方法，试剂盒包括试剂条和定标卡；试剂条包括样品垫、结合垫、分析膜以及吸收垫；所述的分析膜上设置有第一检测线和第二检测线，其中，所述的第一检测线上包被有抗诺如病毒GI抗体，所述的第二检测线上包被有抗诺如病毒GII抗体；定标卡用于给免疫荧光分析仪进行定标，实现定量检测。本发明采用联合定量检测，可以实现对诺如病毒GI/GII抗原的简单、快速、准确定量检测分析。

技术领域

本发明涉及一种诺如病毒GI/GII抗原联合定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

免疫层析技术(ImmunochromatographicAssay，ICA)是20世纪末发展起来的结合免疫技术和色谱层析技术的一种分析方法，该方法具有准确、操作简单、快速、价格便宜、稳定性好等特点，广泛应用于临床诊断、环境监测、食品安全等重要领域。

荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术。该技术以固定有检测线(包被抗体或包被抗原)和质控线(抗抗体)的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于连接垫，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。诺如病毒，又称诺瓦克病毒(Norwalk Viruses，NV)是人类杯状病毒科(HumanCalicivirus，HuCV)中诺如病毒(Norovirus,NV)属的一种病毒。是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。

诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。美国每年在所有的非细菌性腹泻暴发中，60-90％是由诺如病毒引起。荷兰、英国、日本、澳大利亚等发达国家也都有类似结果。在中国5岁以下腹泻儿童中，诺如病毒检出率为15％左右，血清抗体水平调查表明中国人群中诺如病毒的感染亦十分普遍。

诺如病毒感染性腹泻属于自限性疾病，没有疫苗和特效药物，公众搞好个人卫生、食品卫生和饮水卫生是预防本病的关键，要养成勤洗手、不喝生水、生熟食物分开、避免交叉污染等健康生活习惯。

诺如病毒分5个基因组(GⅠ～GⅤ)，其中只有GⅠ、GⅡ和GⅣ可以感染人，而GⅢ、GⅤ分别感染牛和鼠。我国目前最常见的诺如病毒为GⅡ、GⅠ型。GⅡ型含有至少21个基因亚型，毒株变异较快，其中GⅡ.4基因亚型近10年已引起3次全球性流行，分别由2006年GⅡ.4-06Minerva变异株、2009年GⅡ.4-2009New Orleans变异株和GⅡ.4-2012Sydney变异株所致，成为全球重要的公共卫生问题之一。

诺如病毒变异快、环境抵抗力强、感染剂量低，感染后潜伏期短、排毒时间长、免疫保护时间短，且传播途径多样、全人群普遍易感，因此，诺如病毒具有高度传染性和快速传播能力。诺如病毒感染发病的主要表现为腹泻和/或呕吐，国际上通常称之为急性胃肠炎。

目前诺如病毒的主要检测技术有三类：电镜法、核酸检测(PCR)和抗原检测三类方法。其中电镜法的优点是快速简便直接，但其缺点是诺如病毒缺乏典型杯状病毒特征，不易观察，且需要病毒浓度达到一定程度才能观察到，并且电镜价格昂贵，技术要求高，不适合大规模流行病学调查；核酸检测具有高灵敏度和高特异性，常作为诺如病毒检测的标准参考，但是其程序繁琐，标本预处理工序多，受引物设计，核酸纯化，反应条件等限制，仅限于实验室操作，易受到实验室污染而出现假阳，必须在独立的空间进行样品处理和检验；抗原检测(免疫法)和基于侧向免疫层析技术的试纸技术，可直接检测标本中的抗原或抗体，无需专业的检测仪器和场地，已广泛应用于临床检测中，如CN 110456041 A公开了以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应的检测技术，但胶体金技术敏感性较低，检测结果不稳定，临床检测的漏检风险较高；再如，CN 110954695 A公开了以量子点作为标记物联检诺如病毒的技术，但是量子点和某些蛋白质结合后可能导致量子点的荧光减弱或淬灭，并且均只作为定性检测。

发明内容