[发明专利]化学发光清洗液及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种化学发光清洗液及其制备方法和应用，涉及医疗器械体外诊断试剂技术领域，本发明提供的化学发光清洗液，主要由缓冲液、表面活性剂、金属离子和防腐剂组成。其中，非离子表面活性剂与两性表面活性剂联合使用，使得清洗液稳定性好、准确度高；不同种类防腐剂联用，防腐效果好。本发明提供的化学发光清洗液，通过特定组分的选择，解决了进口清洗液价格高昂、检测成本高的问题，成本低廉，并降低了国内对进口清洗液的依赖。同时，该化学发光清洗液适用于碱性磷酸酶体系的化学发光免疫反应，并且经过项目验证，该种化学发光清洗液可适用于碱性磷酸酶体系PCT、AMH、dsDNA、CCP等的多种化学发光检测项目中。

技术领域

本发明涉及医疗器械体外诊断试剂技术领域，尤其是涉及一种化学发光清洗液及其制备方法和应用。

背景技术

化学发光免疫反应的步骤为：加样、温育、洗涤、判读。其中洗涤是决定试验结果的一个重要步骤。洗涤的主要目的是去除未结合的免疫反应物及游离的结合物，终止抗原抗体的继续结合，减少非特异性干扰物质对检测结果的影响。清洗液不仅为免疫反应提供适宜的酸碱环境及电解质，更重要的是除掉反应过程中未结合免疫反应物，终止抗原抗体继续结合，清洗液中的表面活性剂，可有效分离结合的免疫反应物及非特异性干扰物质，保证化学发光免疫检验能正常进行。

其次，全自动化学发光免疫分析仪采用管路、加样针、废液针重复利用，易导致样品交叉污染，进而影响测定结果。因此有效的化学发光清洗液对全自动化学发光免疫分析仪管路、加样针和废液针的维护以及保证样本测试准确具有重要意义。

化学发光按照反应类型可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类，在酶促化学发光中，碱性磷酸酶体系是较为常用的体系之一，其与发光底物反应速度快，在很短时间内可提供正确可靠的结果，且发射光为辉光，光强度在60min内相对稳定，易于测量且稳定性高，应用较为广泛。

CN110862881A公开了一种全自动化学发光测定仪专用的清洗液或其稀释液及其制备方法，主要包含无机盐、磷酸盐缓冲体系、表面活性剂1(吐温-20、吐温80中的一种)、表面活性剂2(十二烷基硫酸钠、月硅酸钠中的一种)、防腐剂(Proclin300和Bronidox)及水构成。该清洗液采用较高浓度的磷酸盐，经验证其会抑制碱性磷酸酶的活性。这是由于碱性磷酸酶体系的化学发光试剂，发光原理为碱性磷酸酶催化底物金刚烷类似物AMPPD，释放磷酸根，形成不稳定的中间体AMP-D，这个中间体随即自行分解，同时发射光子，如果检测试剂的体系中存在较高浓度的磷酸根，则会抑制碱性磷酸酶对底物的催化作用，影响检测反应。该洗液使用的表面活性剂2中的十二烷基硫酸钠即SDS，由于其为粉末状，在称量时操作者容易吸入，对粘膜和上呼吸道有刺激作用，对眼和皮肤有刺激作用，对人体有害；SDS在高浓度时会破坏蛋白结构，使用不当会造成免疫反应中抗原或抗体结构破坏，影响检测反应；SDS溶液在低温时容易产生沉淀，影响洗液洗涤效果。

CN107118865A公开了一种清洗液，包含磷酸缓冲体系、无机盐、表面活性剂A(Triton X-100或吐温-20)、表面活性剂B(胆酸钠)以及防腐剂(Proclin300或Proclin950)，同样该种清洗液采用了较高浓度的磷酸盐，不适用于碱性磷酸酶化学发光体系。该清洗液使用的表面活性剂胆酸钠，可溶解细胞膜，洗涤能力较强，检测过程中已发生特异性结合的抗原或抗体容易被清洗掉，造成检测结果不准确，并且胆酸钠分子结构中含有具有反应活性的氮氢键，在免疫检测时易发生非特异性反应。另外，该清洗液使用的防腐剂Proclin300或Proclin950，为同系列防腐剂，不能达到较好的防腐效果。

CN108546602A公开了一种化学发光免疫分析用清洗液，包括表面活性剂、非蛋白类蛋白保护剂和缓冲剂，该清洗液成分复杂，使用成本较高。该清洗液使用的酰胺类非离子表面活性剂，在洗涤震荡过程中，容易产生气泡，使得仪器液面高度探测不准，造成跳值现象。该清洗液pH为5.32，偏酸性，对碱性磷酸酶体系不适用。另外，该清洗液使用的防腐剂Proclin300，为单一防腐剂，不能达到较好的防腐效果。

有鉴于此，特提出本发明。