[发明专利]一种肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体及其应用

权利要求书

1.一种肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体，其特征在于，由一种带有环状结构并含有NGR序列的短肽、连接肽、肿瘤坏死因子相关凋亡配体而组成的肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体融合蛋白质；所述连接肽为1-25个氨基酸残基；所述氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸中的任意一种或多种，但是所述氨基酸不包括5个甘氨酸的情形。

2.根据权利要求1所述的一种肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体，其特征在于，所述含有NGR序列的短肽放置于肿瘤坏死因子相关凋亡配体N端时，在含有NGR序列的短肽之前增加一个不含支链的的丙氨酸或甘氨酸。

3.根据权利要求1或者2所述的肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体，其中所述的肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体是用聚乙二醇、脂肪酸化、重组加上抗体Fc片段或白蛋白等方法修饰的肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体。

4.根据权利要求1或2所述的肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体的制备方法，其特征是通过人工合成或者基因克隆构建肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体的编码基因，利用常规基因工程方法实现该编码基因的基因工程表达和分离纯化。

5.根据权利要求1或2所述的肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体在大肠杆菌中可溶性表达的方法，其特征在于，权利要求1或3所述的肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体的大肠杆菌重组表达菌株在低温下进行培养和诱导表达，其中低温是指35℃-10℃。

6.一种肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体的分离纯化方法，其特征在于，权利要求1或2所述的肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体通过离子交换层析和金属亲和层析获得纯化。

7.一种编码选自肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体的cDNA，所述cDNA带有编码CD13配体和连接肽的连续序列。

8.一种包含权利要求7的cDNA的基因治疗载体。

9.根据权利要求7或8所述的一种肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体cDNA及其基因治疗载体在制备肿瘤治疗药物中的应用。

10.根据权利要求7或8所述的一种肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体cDNA及其基因治疗载体在制备肿瘤治疗药物中与现有的肿瘤治疗药物和技术在肿瘤治疗中的联合应用。

11.根据权利要求1或2所述的一种肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体在制备肿瘤治疗药物中的应用。

12.根据权利要求1或2所述的一种肿瘤靶向性肿瘤坏死因子相关凋亡配体变体在制备肿瘤治疗药物中与现有的肿瘤治疗药物和技术在肿瘤治疗中的联合应用。