[发明专利]一种表达分泌识别天然样本的单克隆抗体细胞的筛选方法

权利要求书

1.一种表达分泌识别天然样本的单克隆抗体细胞的筛选方法，所述方法包括：制备包被有二抗的酶标微孔板；将所述包被有二抗的酶标微孔板进行封闭处理，得到封闭处理后的包被有二抗的酶标微孔板；向所述封闭处理后的包被有二抗的酶标微孔板中依次添加细胞上清液、天然样本、对应于所述天然样本的酶标抗体、底物显色试剂，得到待测酶标微孔板；针对所述待测酶标微孔板进行吸光度检测，获得筛选结果；

其中，所述二抗包括：山羊抗小鼠IgG二抗或山羊抗兔IgG二抗；

所述对应于所述天然样本的酶标抗体选自：对应于所述天然样本的酶标多抗或对应于所述天然样本的酶标单抗；

所述对应于所述天然样本的酶标抗体的浓度为0.5～5ug/mL。

2.根据权利要求1所述的表达分泌识别天然样本的单克隆抗体细胞的筛选方法，其特征在于，所述制备包被有二抗的酶标微孔板，包括：采用碳酸盐缓冲液将二抗稀释至浓度为1～3ug/ml，得到二抗稀释液；后将所述二抗稀释液以90～110ul/孔的量添加至酶标微孔板内，于温度为4℃下静置16-18h或者于温度为37℃下静置1～3h。

3.根据权利要求1所述的表达分泌识别天然样本的单克隆抗体细胞的筛选方法，其特征在于，将所述包被有二抗的酶标微孔板进行封闭处理，得到封闭处理后的包被有二抗的酶标微孔板；包括：

将封闭液以200～300ul/孔的量添加至所述包被有二抗的酶标微孔板中，于温度为37℃下静置1～3h，后经洗板处理，得到封闭处理后的包被有二抗的酶标微孔板；

其中，所述封闭液的制备方法为：将浓度为0.1M、pH为7.0～7.5的PBS缓冲液与脱脂奶粉混合，得到所述封闭液；其中在所述封闭液中，所述脱脂奶粉的质量与所述PBS缓冲液的体积的比例为3～6g:90～110ml；优选5g:100ml。

4.根据权利要求1所述的表达分泌识别天然样本的单克隆抗体细胞的筛选方法，其特征在于，所述向所述封闭处理后的包被有二抗的酶标微孔板中添加细胞上清液，包括：将细胞上清液以95～105ul/孔的量添加至所述封闭处理后的包被有二抗的酶标微孔板，于温度为37℃下静置1～2h，后经洗板处理；

优选地，所述细胞上清液为小鼠杂交瘤细胞细胞上清液。

5.根据权利要求1所述的表达分泌识别天然样本的单克隆抗体细胞的筛选方法，其特征在于，向所述封闭处理后的包被有二抗的酶标微孔板中添加天然样本，包括：将天然样本以95～105ul/孔的量添加至所述封闭处理后的包被有二抗的酶标微孔板，于温度为37℃下静置1～2h，后经洗板处理；

优选地，所述天然样本包括：血清、尿液、唾液或者组织裂解液。

6.根据权利要求1所述的表达分泌识别天然样本的单克隆抗体细胞的筛选方法，其特征在于，向所述封闭处理后的包被有二抗的酶标微孔板中添加对应于所述天然样本的酶标抗体，包括：将对应于所述天然样本的酶标抗体以95～105ul/孔的量添加至所述封闭处理后的包被有二抗的酶标微孔板，于温度为37℃下静置35～45min，后经洗板处理；

优选地，所述对应于所述天然样本的酶标单抗为辣根过氧化物酶HRP标记的酶标单抗；

优选地，所述对应于所述天然样本的酶标多抗为辣根过氧化物酶HRP标记的酶标多抗。

7.根据权利要求3至6中任一项所述的表达分泌识别天然样本的单克隆抗体细胞的筛选方法，其特征在于，所述洗板处理包括：

(1)将所述包被有二抗的酶标微孔板在温度为18～31℃下甩干；

(2)将PBST缓冲液以190～210ul/孔的量添加步骤(1)得到的酶标微孔板中，静置0.5～2min，后在温度为18～31℃下甩干；

(3)将所述步骤(1)至所述步骤(2)重复2～4次。