[发明专利]一种创伤弧菌RPA-LFS快速检测方法的建立及应用

权利要求书

1.一种创伤弧菌RPA-LFS快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)引物设计及筛选：

上游引物：5’-GAGATGGATTCTTTGTATAACATTGCGT

下游引物：5’-ACGATGACGTTGGTTGTGTTACATTATC

2)探针设计及筛选：

探针：

FITC-GGTGAAGTTGGCTGGTGGTTATTTTCAGAA[THF]CATGGTTGTTGAGCTC-SpC3。

3)RPA-LFS特异性检测。

4)RPA-LFS反应温度优化。

5)RPA-LFS反应时间优化。

6)RPA-LFS最低检出限测定。

2.根据权利要求1所述的一种创伤弧菌RPA-LFS快速检测方法的应用，其特征在于：

所述引物探针筛选探针长度至少46bp；

所述探针5’末端用FITC进行标记，3’末端引入3C-spacer进行末端封闭，在探针中间引入THF，即无嘌呤无嘧啶位点(AP位点)；

所述AP位点前至少要保留30bp的碱基，AP位点之后至少有15bp的碱基，下游引物的5’末端标记生物素。

3.根据权利要求1所述的一种创伤弧菌RPA-LFS快速检测方法的应用，其特征在于，所述RPA-LFS初步应用检测，并用RPA-LFS检测体系对临床样本进行检测，所述检测结果同时与传统培养法和qPCR法对比，所述55个对虾样本中，RPA-LFS检测出7个阳性结果，25个贝类样本中检测出5个阳性结果，6个鱼和2个螃蟹样本检测结果均为阴性。