[发明专利]一株犬细小病毒new CPV-2b毒株及其应用

说明书

本发明公开了一株犬细小病毒(Canine Parvovirus，CPV)株newCPV‑2b/YXY/2019，其微生物保藏编号为CGMCC No.19297。将该毒株灭活后制备得到的灭活疫苗对动物具有优良的保护水平，显著优于商品化疫苗株，具有开发成为兽医临床应用疫苗的巨大潜力和价值。

技术领域

本发明属于微生物、生物工程领域，具体涉及一株犬细小病毒(CanineParvovirus，CPV) CPV-2b/YXY/2019毒株及其应用。

背景技术

犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV)被认为是世界上最小的DNA病毒之一，病毒颗粒呈 球形，结构呈20面体对称，直径约为18-30nm左右(RIMMELZWAAN et al.,1991；AGBANDJE et al.,1993)，没有囊膜包被，是单股负链的DNA病毒。

CPV最早是1976年被学者Binn在健康犬体内被分离，当时将该病原称为CPV-1,也叫做 犬极细小病毒(Minute virus of canine,MVC)。随后1977年由Eugster和Naiml(罗朝科等,1995) 两位学者从患有出血性肠炎犬的粪便中分离出了与CPV-1差异较大的CPV-2，随后英国、德 国等国家相继出现有关于CPV-2的报道出现(SAGAZIO et al.,1998)，1983年犬细小病毒病 被徐汉坤证实我国存在该病毒的流行(徐汉坤等,1983)。CPV于20世纪70年代被认为是犬 病毒病病原，追根溯源到它的祖先，普遍认为其祖先是猫泛白细胞减少症病毒(FPV)，虽无 证据确定是否经其他种类的动物来达到可对犬类感染的变异，但CPV-2可以引起犬类的出血 性肠炎。FPV与CPV-2之间有六到七个决定了VP2结构域中关系到宿主细胞转铁蛋白受体 (TfR)的氨基酸发生了变化。CPV相比FPV而言其基因的突变率要高一些(BATTILANI et al.,2006；DECARO et al.,2009；DECARO et al.,2008；SHACKELTON etal.,2005)，这也构成了 CPV与FPV之间的区别，突变率大约在每个位点每年约10^-4次置换/位点/年(HOELZER et al., 2008b；PARRISH et al.,1999)。1978年后，两个新型抗原突变出现，可通过单克隆抗体区分它 们，分别为Parrish等人1985年发现的CPV-2a型和1991年CPV-2b型(HOELZER et al.,2008a； PARRISH et al.,1985)。CPV-2a与CPV-2相比，CPV-2a的VP2基因在87(Met→Leu)、 101(Ile→Try)、300(Ala→Gly)、305(Asp→Try)和555位(Val→Ile)发生了突变。基因序列 分析发现，多数CPV-2a又发生了555位(Ile→Val)回复性突变。Parrish(1991)在1991年 对前几年分离的病毒以单克隆抗体进行分型，结果显示CPV-2a和CPV-2存在1-2个抗原性中 和表位差异，即产生了新抗原变异株CPV-2b。将其与CPV-2a基因序列差异进行分析后发现， 在VP2基因的426和555位氨基酸位点存在Asn→Asp和Ile→Val的突变，但CPV-2b不仅能 感染犬还可以在猫的体内复制病对猫致病(ZHANG et al.,2010)。直到2000年一直是以 CPV-2a和CPV-2b为主要流行。20世纪90年代早期，VP2基因的297位(Ser→Ala)产生的 突变，产生了新的CPV-2a和CPV-2b株即命名为NewCPV-2a和NewCPV-2b变异株，并逐渐 在犬、猫中流行。虽然297位(Ser→Ala)变异不能明显改变病毒抗原性表位，但由于其在空 间结构与衣壳蛋白表面纤突非常接近，这就可能会影响病毒与宿主动物受体的亲和力，使其 免疫起不到保护作用(OHSHIMA et al.,2008；BUONAVOGLIAet al.,2001)。意大利在2000 年检测到了一种新的抗原型的CPV(DECARO et al.,2006)，通过一系列的鉴别措施发现该抗 原性的CPV与CPV-2a和CPV-2b有S 297A和D 426E两个氨基酸位点的不同，其VP2蛋白 上的第426位氨基酸出现了Asp-Glu的替换(et al.,2007)，从此CPV-2c型出现并且 流行开来。