[发明专利]海洋放线菌HN60在制备抗真菌活性物质中的应用

说明书

本发明属农业技术领域，具体涉及海洋放线菌菌株HN60在制备抗真菌活性物质中的应用。通过16S rDNA序列分析及生理生化实验，该菌株为灰平链霉菌，其保藏编号为CGMCC No.18948。所述抗菌活性物质来源于菌株HN60经液体发酵后的发酵液，所述菌株HN60经液体发酵条件为：在30℃、180 r/min条件下，在培养基中摇床培养6 d；其中培养基组分为：酵母浸粉4g，葡萄糖4g，麦芽浸粉10g，海水1 L，pH 7.2~7.4。所述菌株产生的抗生素对黄曲霉、稻瘟霉、大豆炭疽、芦笋枯萎病原菌等多种病原菌具有较好的抑制效果，可制备用于防治农作物病害的微生物药剂。

技术背景

本发明属于农业技术领域，涉及微生物及其应用，具体涉及海洋放线菌HN60在制备抗菌真活性物质中的应用。

技术背景

生物防治是对于农作物病害治理的重要内容之一。化学农药的长期持续使用，对农作物病害本身及环境带来一系列严重问题，主要表现为防效降低、农药残留超标、自然控制力减弱和严重的环境污染。尤其90年代以来，“生态农业”、“有机农业”和环境保护等观念得到重视，我国生物防治发展迅速。

放线菌作为生防菌对很多病原菌有明显的拮抗效果，有许多的成型制剂已应用到生产上，如井岗霉素。随着农用抗生素的应用，作为抗生素生产菌的放线菌得到广泛关注。链霉菌是高等放线菌，是种类和数量较多的放线菌之一，在防治植物病害中起重要作用。

发明内容

本发明的目的在于提供海洋放线菌HN60在制备抗真菌活性物质中的应用，所述菌株HN60的发酵液对黄曲霉、稻瘟霉、大豆炭疽、芦笋枯萎病原菌具有较好的抑制作用。

一种海洋放线菌菌株HN60，是发明人在海口红树林地区采集的土壤中分离得到的一种放线菌。该菌株的保藏信息为：

名称：Streptomyces griseoplanus HN60，以下简称HN60；

保藏编号：CGMCC No . 18948；

保藏时间：2019年11月13日。

上述海洋放线菌HN60的分离培养方法：

将在海口红树林地区采集的土壤样品室温下放置14~21 d进行风干，随后用4种不同的培养基对样品进行海洋放线菌的筛选，筛选培养基配方见表1。土壤样品用无菌生理盐水进行系列稀释，浓度分别为10^-1~10^-3。不同浓度稀释液分别取100 μL涂布于不同的筛选培养基（所有筛选培养基分别加入重铬酸钾及萘啶酮酸，终浓度分别75 μg/mL及25 μg/mL，28℃培养14~28 d。采用高氏一号培养基对筛选出的放线菌进行分离纯化，纯化出的放线菌-80℃保存备用。

表1 海洋放线菌筛选培养基配方

本发明还结合形态学特征对菌株HN60进行了分类学鉴定。将菌株HN60接种于培养基上，呈现的形态学特征为：菌落呈圆形、淡黄色、表面干燥呈凸起状，菌丝丰富、有分叉、无断裂。

本发明通过16S rDNA序列方法对菌株HN60进行了分类鉴定。提取此菌的DNA，扩增16S rDNA的序列。从菌株HN60与链霉菌已有效发表中16S rDNA序列构建处的系统发育树可以获知，菌株HN60属于灰平链霉菌。

进一步地，所述抗菌活性物质来源于菌株HN60经液体发酵后的发酵液，所述发酵条件为：在28℃、180 r/min条件下，在培养基中摇床培养6 d；其中培养基组分为：酵母浸粉4g/L，葡萄糖 4g/L，麦芽浸粉 10g/L，pH 7.2~7.4。

进一步地，所述菌株HN60的发酵液用于抑制黄曲霉、稻瘟霉、大豆炭疽或芦笋枯萎病原菌的生物活性。