[发明专利]靶向冠状病毒SPIKE的武装嵌合抗原受体细胞及制备方法和应用

权利要求书

1.靶向SARS-CoV-2病毒SPIKE的武装嵌合抗原受体修饰的免疫细胞，其特征在于所述的免疫细胞含有嵌合抗原受体，所述的嵌合抗原受体的氨基酸序列为：

从氨基端到羧基端顺次连接的引导序列的氨基酸序列、靶向结合SARS-CoV-2病毒SPIKE蛋白的胞外识别结构域氨基酸序列、铰链区氨基酸序列、跨膜结构域氨基酸序列、胞内信号结构域氨基酸序列和含抗细胞因子受体组件的氨基酸序列；

其中靶向结合SARS-CoV-2病毒SPIKE的胞外识别结构域氨基酸序列为：（1）SEQ IDNo.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6 或SEQ ID No.7所示的人ACE2蛋白的氨基酸序列；或与所示SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6 或SEQ ID No.7氨基酸序列具有90~99％同源性的经过氨基酸修饰产生的变体；

所述跨膜结构域包含CD8跨膜结构区、CD28跨膜结构区、4-1BB跨膜结构区、OX40跨膜结构区、ICOS跨膜结构区；

所述免疫受体酪氨酸活化基序包含CD3ζ链的胞内信号结构域或FcεRIγ胞内信号结构；

所述共刺激信号域包含CD28胞内信号结构域、CD137/4-1BB胞内信号结构域、CD134/OX40胞内信号结构域和ICOS胞内信号结构域；

所述含抗细胞因子受体组件含有如SEQ ID No.17所示的IL-6R的scFv氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于

编码权利要求1所述的特异性敲除SARS-CoV-2病毒RNA聚合酶的靶向SARS-CoV-2病毒SPIKE蛋白的武装嵌合抗原受体的核酸分子，包括从5’到3’依次串联连接的编码所述引导序列的核苷酸序列、人ACE2的核苷酸序列、编码铰链区的核苷酸序列，编码所述跨膜结构域的核苷酸序列、编码所述胞内信号结构域的核苷酸序列、编码所述抗细胞因子受体组件的核苷酸序列和编码特异性敲除RNA聚合酶的SARS-CoV-2病毒核苷酸序列；

其中：

所述编码引导序列的核苷酸如SEQ ID No.18所示；

所述编码人ACE2的核苷酸序列如SEQ ID No.19、SEQ ID No.20、SEQ ID No.21、SEQ IDNo.22、SEQ ID No.23或SEQ ID No.24所示；

编码铰链区的核苷酸包括：人CD8的核苷酸序列或人IgG1的核苷酸序列；

编码所述跨膜结构域包括：人CD8的核苷酸序列；

编码胞内信号结构域的核苷酸序列包括：人4-1BB胞内结构域、人CD3ζ胞内结构域或CD3ζ胞内结构域；其中，所述编码人4-1BB胞内结构域的核苷酸序列；所述编码人CD28胞内结构域的核苷酸序列；所述编码人CD3ζ胞内结构域的核苷酸序列；

编码含抗细胞因子受体组件的核苷酸序列包括：如SEQ ID No.25所示的Furin-2A的核苷酸序列、如SEQ ID No.26所示IL-2信号肽的核苷酸序列或如SEQ ID No.27所示IL-6R的scFv核苷酸序列；

编码特异性敲除SARS-CoV-2病毒RNA聚合酶的核苷酸序列如SEQ ID No.32、SEQ IDNo.33、SEQ ID No.34、SEQ ID No.35、SEQ ID No.36、SEQ ID No.37或SEQ ID No.38任一项所示，或者分别与如SEQ ID No.32、SEQ ID No.33、SEQ ID No.34、SEQ ID No.35、SEQ IDNo.36、SEQ ID No.37或SEQ ID No.38所示核苷酸序列同源性为90~99%。

3.一种特异性敲除SARS-CoV-2病毒RNA聚合酶靶向SARS-CoV-2病毒SPIKE武装嵌合抗原受体的重组载体，其特征在于包含权利要求2中所述的核酸分子。

4.根据权利要求3所述重组载体，其特征在于表达质粒含有启动子，其中所述启动子包括如SEQ ID No.28所示的U6启动子和如SEQ No.30所示的EF1α长启动子，或所述启动子为SEQ No.31所示的EFS短启动子。