[发明专利]一种抗CD20的纳米抗体、编码基因、重组纳米抗体、重组载体、重组菌株和应用

说明书

本发明提供了一种抗CD20的纳米抗体、编码基因、重组纳米抗体、重组载体、重组菌株和应用，属于免疫学技术领域，本发明提供的所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；本发明所述重组纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。本发明提供的所述抗CD20的重组纳米抗体由包括驼源的纳米抗体基因和人IgG Fc段基因融合表达，能够利用所述重组菌株进行稳定表达，并能够特异性识别CD20抗原。

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，尤其涉及一种抗CD20的纳米抗体、编码基因、重组载体、重组菌株和应用。

背景技术

人白细胞分化抗原20(CD20抗原)是一种B淋巴细胞表面分化抗原，在95％B细胞肿瘤中均有表达，而在正常组织中不表达，在与其抗体结合后，无显著内化及脱落，故成为治疗B细胞淋巴瘤的理想靶点。

纳米抗体是由比利时科学家于1993年在Nature中首次报道，在羊驼外周血液中存在的一种天然缺失轻链的抗体(VHH)，1995年又在护士鲨、斑纹须鲨、银鲛等软骨鱼中发现，是目前已知的可结合目标抗原的最小单位。VHH分子量只有15KD，因此也被称作纳米抗体(Nanobody， Nb)。纳米抗体具有独特优势，包括分子量小、可溶性好、稳定性强、亲和力高、免疫原性低、体内组织渗透性好，极易穿过血管或组织到达靶部位等，具有很大发展空间，纳米抗体的应用也非常广泛，临床上既可用于肿瘤治疗，也可作为诊断工具。

目前已成功开发的靶向CD20的抗体药物有十多种，Rituximab是1997 年FDA批准的全球第一个靶向CD20用于治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤 (B-NHL)的单克隆抗体，属于人鼠嵌合单抗，拥有鼠源的可变区域和人源的恒定区域，是迄今商业化最成功的CD20单抗药物，由美罗华公司研发。尽管其在临床治疗中己显示出较好的疗效，但是由于人源化程度低，部分患者治疗无效、耐药或产生不良反应。而且，由于该抗体具有鼠源性，长期使用会引起人抗鼠抗体反应，无法继续使用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗CD20的纳米抗体、编码基因、重组载体、重组菌株和应用；所述抗CD20的重组纳米抗体由包括驼源的纳米抗体基因和人IgG Fc段基因融合表达，能够特异性识别CD20抗原。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种抗CD20的纳米抗体，所述纳米抗体的氨基酸序列如 SEQ IDNo.1所示。

本发明提供了一种编码所述纳米抗体的基因，所述基因的核苷酸序列如 SEQ IDNo.2所示。

本发明提供了一种抗CD20的重组纳米抗体，包括所述的抗CD20的纳米抗体和人IgG Fc段。

优选的，所述重组纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

本发明提供了一种编码所述重组纳米抗体的基因，包括所述的纳米抗体的基因和人IgG Fc段基因；所述纳米抗体基因和人IgG Fc段基因通过连接片段连接，所述连接片段的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

优选的，所述重组纳米抗体的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

本发明提供了一种表达抗CD20的纳米抗体的重组载体，包括所述重组纳米抗体的基因和初始载体。

优选的，所述初始载体为pCZN1质粒载体。

本发明提供了一种表达抗CD20的纳米抗体的重组菌株，包括所述的重组载体和大肠杆菌Arctic Express。

本发明提供了所述的抗CD20的纳米抗体、所述编码抗CD20纳米抗体的基因、所述重组纳米抗体、编码所述重组纳米抗体的基因、所述重组载体、所述的重组菌株在制备抗肿瘤药物或肿瘤诊断试剂中的应用。