[发明专利]超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗抑郁药物浓度的方法

说明书

本发明公开了超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗抑郁药物浓度的方法，这些药物分别为：安非他酮、阿戈美拉汀、羟安非他酮、去甲替林、o‑去甲文拉法辛、米安色林、米氮平、文拉法辛、阿米替林、多虑平、去甲氟西汀、度洛西汀、氟西汀、氟伏沙明、西酞普兰、帕罗西汀、曲唑酮和伏硫西汀。血清样本经预处理后，先利用超高效液相色谱将待测物与血清基质进行分离，再利用质谱同位素内标定量法，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物的峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算血清中药物的含量。本发明方法灵敏度高、特异性强、准确且前处理过程较简单，4.5min之内可完成分离和检测，准确度和精密度基本满足要求。

技术领域

本发明属于血液检测技术领域，具体涉及超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗抑郁药物浓度的方法。

背景技术

目前抑郁症常用的治疗药物根据其作用机制分为：去甲肾上腺素再摄取抑制剂、5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂(SSRI)、5-HT和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)、去甲肾上腺素和特异性的5-HT能抗抑郁药(NaSSA)、5-HT2受体拮抗药和5-HT再摄取抑制剂、去甲肾上腺素和多巴胺再摄取抑制剂和褪黑素受体激动药。

国内外文献报道中测定人血清或血浆中抗抑郁药的方法主要有HPLC-UV法、GC-MS法和LC-MS/MS法，比如文献“Quantification of 33antidepressants by LC-MS/MS—comparative validation in whole blood,plasma and serum”报道一种液液萃取检测33种抗抑郁药方法，但是前处理需要液液萃取，氮吹浓缩等复杂程序，每个样本采集需要30分钟。比如，中国专利(CN108982714A)公开了“一种简便高效检测人血浆中文拉法辛及其活性代谢物o-去甲文拉法辛浓度的方法”，该发明是将500μL血浆样本加入乙醚进行液液萃取，然后氮吹后复溶进样，再通过高效液相荧光法检测待测物浓度；此发明前处理费时费力，样本用量大，而且单个样本的分析时间较长。另，中国专利(CN 109655568A)公开了一种“高效液质联用同时测定35种精神药物的方法及试剂盒”，该发明虽前处理简单，但使用外标法定量，准确性差。再比如，西北药学杂志2019年11月第34卷第6期题为“LC-MS/MS法同时测定人血浆中氟西汀、去甲氟西汀、帕罗西汀和氟伏沙明的质量浓度”，该发明使用200μL血浆进行蛋白沉淀，样本用量大；使用罗红霉素作为所有待测物的内标，缺乏普遍适用性和准确性，可能会存在基质效应干扰；4种药物的线性范围均相同，未经临床验证，缺乏合理性。此外，因为临床样本极其珍贵，因此前处理样本量尽量要少，且进样量大会严重污染仪器，增加仪器维护成本。本发明采用单一方法评估不同抗抑郁药将会大大简化和方便实验室监测，满足临床的需求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗抑郁药物浓度的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗抑郁药物浓度的方法，

血清样本通过预处理取上清进样，先利用超高效液相色谱将抗抑郁药物浓度与血清基质分离，再利用质谱同位素内标定量法，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物的峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算抗抑郁药物的含量。具体色谱条件为：

(1)高效液相色谱条件：

流动相A：水(含0.01％甲酸)；

流动相B：甲醇(含0.01％甲酸)；

色谱柱：Phenomenex Kintex C18(2.1×100mm，2.6μm)；

采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，见表1；所述梯度洗脱过程如下：