[发明专利]一种免提取直接扩增及检测高发肿瘤易感基因多态性的引物组和探针、试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种同时扩增多个基因的引物组，其特征在于，所述引物组中的各个引物的5’端均含有接头序列SEQ ID NO:142或143，当上游引物的接头序列为SEQ ID NO:142时，其对应的下游引物的接头序列为SEQ ID NO:143；当上游引物的接头序列为SEQ ID NO:143时，其对应的下游引物的接头序列则为SEQ ID NO:142，然后再加上常规引物设计序列；

所述多个基因为至少30个基因，选自rs17401966、rs7574865、rs4678680、rs157224、rs1805794、rs568408、rs13361707、rs9841504、rs873601、rs1801133、rs1946518、rs2890658、rs401681、rs944289、rs965513、rs1799939、rs1800863、rs6983267、rs3802842、rs17655、rs696、rs4963、rs3750050、rs1342387、rs1219648、rs3803662、rs3737559、rs1003623、rs4246215、rs174538、rs2046210、rs15869、rs13117307、rs8067378、rs4282438、rs25487、rs767649、rs7248320、rs1126477、rs1413299、rs1192691、rs11175194、rs633862、rs817826、rs1512268、rs10993994、rs12621278。

2.如权利要求1所述同时扩增多个基因的引物组，其特征在于，所述多个基因为47个基因。

3.如权利要求1所述同时扩增多个基因的引物组，其特征在于，所述多个基因为47个肿瘤基因。

4.如权利要求1所述同时扩增多个基因的引物组，其特征在于，所述常规引物设计序列如SEQ ID NO:1-2；4-5,7-8......139-140所示。

5.一种同时扩增多个基因的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1-4任一所述引物组。

6.一种免提取直接扩增检测多个基因多态性的引物组和探针，其特征在于，所述引物组序列如权利要求1或2所述；所述探针的序列为三个任意的硫代化的碱基序列加上常规探针设计序列；所述探针的序列如 SEQ ID NO:146,149,152......281，284所示，探针的5'、3'末端标记有荧光基团。

7.一种免提取直接扩增检测多个基因多态性的试剂盒，其特征在于，含有权利要求4所述的引物组和探针。

8.如权利要求7所述试剂盒，其特征在于，还含有10×PCR反应液、dNTP、Mg²⁺和Taq DNA聚合酶。

9.一种非诊断目的的免提取并同时富集多个位点的特异性DNA片段的方法，其特征在于，使用了权利要求1-4任一所述的引物组，或权利要求5所述的试剂盒。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法采用了PCR扩增，PCR扩增的预扩反应体系为，

25μl的反应体系：3μl检测样本，10×PCR反应液，Taq DNA 聚合酶，终浓度为2.5mmol/L的dNTP，终浓度为3.5mmol/L的 Mg²⁺，终浓度为5umol/L的Oligo Mix，余量为无菌水；所述Oligo Mix 含有等量的SEQ ID NO:144-145；147-148,150-151...... 282-283；

PCR扩增的预扩反应程序为：

第一步骤：95℃ 5min；循环一次；

第二步骤：94℃ 30s；56℃ 30s；72℃ 30s；循环22次；

第三步骤：72℃ 10min；循环一次。