[发明专利]一种牛精子冻存液及其制备方法

说明书

本发明提出了一种牛精子冻存液，包括A液和B液，以所述A液的质量计，所述A液包括以下组分：35.0±0.5gTris，17.0±0.5g柠檬酸，12.5±0.5g果糖，30±0.5g改性卵磷脂，1000000IU庆大霉素，以注射用水溶解；以所述B液的质量计，所述B液包括以下组分：35.0±0.5gTris，17.0±0.5g柠檬酸，12.5±0.5g果糖，30±0.5g改性卵磷脂，12％甘油，1000000IU庆大霉素，以注射用水溶解。本发明通过使用改性卵磷脂代替卵黄，使产品稳定性增强，通过添加芝麻酚、番茄红素、黄岑素、β‑乳球蛋白，提高精子解冻后质量以及抗氧化能力。

技术领域

本发明涉及一种牛精子冻存液及其制备方法。

背景技术

精液冷冻保存技术是一种先进的动物繁殖技术，其基本原理是通过降低或抑制精子新陈代谢强度达到延长精子在体外存活时间的目的冷冻精液解决了精液长期保存问题，使输精不受时间、地域与种畜生命的限制，极大地优良公畜的利用率，提高了经济效益。

目前市面上已有的精子冻存液大部分添加了卵黄，但是卵黄来源于鸡蛋，鸡蛋的批次不同成分含量也不尽相同，使产品质量不稳定，并且蛋黄里面的生物活性蛋白物质可能引发潜在过敏反应，在后期清洗中难以去除。

在逐级低温冻存和复苏的过程中，精子细胞会发生氧化反应，导致精子凋亡。而目前的产品几乎没有针对氧化应激的措施。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，本发明提出了一种牛精子冻存液及其制备方法，解决现有产品中添加卵黄物质带来的稳定性问题，以及冻存过程中精子的氧化应激反应。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种牛精子冻存液，包括A液和B液，以所述A液的质量计，所述A液包括以下组分：

35.0±0.5g Tris，17.0±0.5g柠檬酸，12.5±0.5g果糖，30±0.5g改性卵磷脂，1000000IU庆大霉素，以注射用水溶解；

以所述B液的质量计，所述B液包括以下组分：

35.0±0.5g Tris，17.0±0.5g柠檬酸，12.5±0.5g果糖，30±0.5g改性卵磷脂，12％甘油，1000000IU庆大霉素，以注射用水溶解。

进一步地，所述牛精子冻存液A液中还包括以下组分：0.2±0.05g芝麻酚，1.0±0.1g番茄红素，0.04±0.01g黄岑素，20±0.5gβ-乳球蛋白。

进一步地，所述A液制备方法包括以下步骤：

S1、按配方称取Tris、柠檬酸、果糖，溶于500mL注射用水中；

S2、将改性卵磷脂溶于300mL注射用水中后与S1中所得溶液混合；

S3、将S2中所得溶液定容至1L，调节pH后经过0.22μm滤膜过滤；

S5、将配置好的溶液按每瓶100mL无菌分装，2-8℃避光保存；

所述B液制备方法包括以下步骤：

S1、按配方称取Tris、柠檬酸、果糖，溶于500mL注射用水中；

S2、将改性卵磷脂溶于300mL注射用水中后与S1中所得溶液混合；

S3、向所述S2所得混合液中加入甘油，庆大霉素；

S4、将S3中所得溶液定容至1L，调节pH后经过0.22μm滤膜过滤；

S5、将S4中配置好的溶液按每瓶100mL无菌分装，2-8℃避光保存。

进一步地，所述A液与B液制备方法中所用注射用水均为55℃。