[发明专利]一种乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物及应用、试剂盒

说明书

本发明公开了一种乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物及应用、试剂盒，涉及肿瘤分子诊断技术领域。发明人研究发现，植物同源结构域锌指蛋白20(PHF20)在乳腺癌中高表达。而用shRNA基因沉默的方法对其下调后，对于乳腺癌细胞的成瘤都有明显的抑制作用。这表明PHF20除作为乳腺癌标志物外还可以作为药物调控的靶标。本发明为乳腺癌治疗和诊断提供了新生物标志物。PHF20作为乳腺癌的肿瘤标志物可用于制备乳腺癌辅助诊断、疗效预测及预后判断的试剂盒，具有重要的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及肿瘤分子诊断技术领域，尤其涉及一种乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物及应用、试剂盒。

背景技术

乳腺癌是在女性中常见的恶性肿瘤之一，在美国等西方国家约有11％的女性患有乳腺癌。在我国，随着城市化的扩大和生活方式的改变，乳腺癌患者以每年160万的速度在快速增加，每年因乳腺癌死亡的患者高达120万。

乳腺癌患者在接受治疗后死亡的主要原因是肿瘤的耐药与转移，而癌症干细胞具有抵抗放疗和化疗的特点，因此被认为是肿瘤耐药和转移从而导致治疗方案失败的根源。传统的放疗与治疗手段被证明导致了乳腺癌干细胞在肿瘤中的富集。新的治疗方案有：根据肿瘤干细胞的标志物特征靶向消除癌症干细胞、抑制乳腺干细胞癌变的信号传导通路。但目前针对乳腺癌干细胞相关的标志物和信号通路的靶向治疗都存在问题：目前还没有找到有治疗价值的特异性的乳腺癌干细胞标记物；信号转导通路在正常细胞中也会表达，通过抑制通路的药物也被报道具有严重的副作用。

因此，寻找更具有特异性的分子事件，从而为乳腺癌的治疗提供新策略，显得尤为有价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足和缺陷，提供一种乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物，为乳腺癌肿瘤的治疗提供新的靶点。

本发明的另一目的在于将该肿瘤标志物用于制备乳腺癌肿瘤辅助诊断、疗效预测及预后判断的制剂或试剂盒。

为了解决上述问题，本发明提出以下技术方案：

本发明提供的一种肿瘤标志物PHF20作为乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物的用途。PHF20的序列如SEQ ID NO.5所示。

一方面，本发明提供的一种乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物，所述肿瘤标志物为PHF20，是MOF复合物的组成蛋白之一，通过其Tudor区域识别二甲基化的组蛋白赖氨酸位点。

发明人通过实验数据进行分析和验证，创造性地发现了PHF20基因与乳腺癌的关系，PHF20有望成为乳腺癌肿瘤诊断和预后判断的标志物，这为乳腺癌肿瘤的治疗提供了新的靶点。因此，PHF20可用于制备乳腺癌肿瘤辅助诊断、疗效预测及预后判断制剂，还可用于制备乳腺癌肿瘤辅助诊断、疗效预测及预后判断试剂盒。

本发明另一方面提供一种乳腺癌辅助诊断、疗效预测及预后判断的试剂盒，所述试剂盒中包括PHF20的特异性引物和内参基因GAPDH的特异性引物。所述PHF20的特异性上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示，所述PHF20的特异性下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，所述GAPDH的特异性上游引物的序列如SEQ ID NO.3所示，所述GAPDH的特异性下游引物的序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明提供的乳腺癌辅助诊断、疗效预测及预后判断的试剂盒为实时荧光定量PCR检测试剂盒。PHF20、内参基因GAPDH的特异性引物适用于SYBR Green的检测。另外，试剂盒中还包括标准DNA模板和PCR反应体系，PCR反应体系中的PCR反应液为实时荧光定量PCR反应液，并进一步包含荧光染料。所述实时荧光定量PCR反应液包括dNTP、Mg2+、Taq酶及缓冲液，所述荧光染料为SYBR Green II，Taq酶为热启动酶。

本发明还提供利用上述试剂盒检测PHF20的方法，过程如下：

1)提取样品总RNA；