[发明专利]一种快速检测百日咳杆菌的试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种快速检测百日咳杆菌的试剂盒及其检测方法。特异的探针与高耐受性聚合酶技术相结合，样本经过简单的加热处理后可以直接扩增，无需提核酸步骤，减少百日咳样本的处理样本的时间。百日咳杆菌检测的所用的成分制备成干粉制剂，显著提高了试剂盒的热稳定性，可用于常温运输。多成分干粉剂的单管包装减少了配液的步骤。实验结果证明，本发明所述的试剂盒及其检测方法，特异性强，灵敏度高，操作简单，能够对百日咳杆菌进行直接快速准确的检测。

技术领域

本发明涉及病原体核酸检测技术领域，具体涉及一种快速检测百日咳杆菌的试剂盒及其检测方法。

背景技术

百日咳杆菌（Bordetella Pertussis，BP）是百日咳的致病菌，百日咳潜伏期1~2周,发病早期(卡他期)仅有轻度咳嗽，细菌此时在气管和支气管粘膜上大量繁殖并随飞沫排出，传染性最大。1~2周后出现阵发性痉挛性咳嗽(痉咳期)，这时细菌释放毒素，导致粘膜上皮细胞纤毛运动失调，大量粘稠分泌物不能排出，刺激粘膜中的感受器产生强烈痉咳，呈现出特殊的高音调鸡鸣样吼声，形成的粘液栓子还能堵塞小支气管导致肺不张和呼吸困难、紫绀，4~6周后逐渐转入恢复期，阵咳减轻，趋向痊愈。百日咳易致窒息和惊厥，且有较严重的并发症，如肺炎、百日咳脑病、心血管系统障碍、营养不良等，是严重威胁人类健康的主要传染病之一。

目前，临床上较为常见的百日咳诊断方法为培养方法和血清学筛查，但百日咳杆菌分离培养难度大，培养周期长，而血清学筛查存在灵敏性低，特异性不高的缺陷，这些因素限制了上述两种百日咳杆菌检测方法在临床上的应用。虽然近年来分子核酸诊断技术大大加快了临床检测，但是在处理样本过程中，操作仍然比较繁琐且耗时。并且，已有百日咳杆菌核酸检测技术需要通过繁琐的步骤来提取病原体中的核酸，以满足PCR反应体系的要求，并且使用过程中需要完成多管的配液，不便于使用。另外，已有百日咳杆菌核酸检测试剂盒需要严格保存在-18℃一下。其运输依赖于冷链物料运输，运输成本和保存都不方便。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种快速检测百日咳杆菌的试剂盒。

本发明的再一目的是，提供一种一种快速检测百日咳杆菌的方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种快速检测百日咳杆菌的试剂盒，所述试剂盒包括百日咳特异性引物、特异性检测探针、高耐受性聚合酶、无菌水和dNTP。

进一步地，所述特异性引物位和特异性检测探针与百日咳杆菌的IS110样元件IS1663家族转座酶保守基因的序列结合，能够与序列相似的霍氏鲍特菌、副百日咳杆菌相区别。

进一步地，所述的特异性引物序列为：SEQ ID NO:1: ATGCGCGTCAACTGCGCGCCTTGTTGACGCGACGCG，SEQ ID NO:2: GCGATGGCCTTGTCGATGGAACCATCGACCAAG。

进一步地，所述的特异性检测探针序列为：SEQ ID NO:3: CTGAGCAAGGATCTGTTGCGTGAGCTCAATCGCAAAGAGAAGAGCCAGTTCAGCC。

进一步地，所述的特异性探针序列5’端标记的荧光基团选自FAM、HEX、VIC、CY5、TET中一种，探针序列3’端标记的淬灭基团选自TAMRA、MGB、BHQ中一种。

进一步地，所述的高耐受性聚合酶为OmniTaq酶。

进一步地，所述的特异性引物、所述的特异性检测探针、所述的高耐受性聚合酶、所述的盐混合物和所述的dNTP为干粉制剂。

进一步地，所述的干粉制剂包装在一个管子内。

一种利用权利要求1所述试剂盒检测百日咳杆菌核酸的方法，包括以下步骤：