[发明专利]间充质干细胞培养用可降解微载体的制备方法及其产品和应用

权利要求书

1.一种间充质干细胞培养用可降解微载体的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

(1)制球：将浓度为1％-2％的纳米化海藻酸钠溶液滴入浓度为0.5％-3％的氯化钙溶液中反应生成海藻酸钙胶珠，所述纳米化海藻酸钠溶液与所述氯化钙溶液的体积比为1:3-1:5；

(2)洗涤：除去多余的氯化钙溶液，用无菌纯化水洗涤一次；

(3)明胶包被：将浓度为0.05％-5％的明胶溶液和浓度为0.3％-1％的戊二醛溶液等比例混合均匀制得混合液，将所述海藻酸钙微胶珠浸泡在所述混合液中反应，所述混合液与纳米化海藻酸钠溶液的体积比为1-3：1；

(4)洗涤：待所述包被反应结束后，除去多余的混合液，用无菌纯化水洗涤三次；

(5)中和：加入浓度为0.5％-2％的甘氨酸溶液反应，所述甘氨酸溶液的体积与步骤(3)所述的混合液体积相同；

(6)洗涤：弃反应后的废液，用无菌纯化水洗涤三次；

(7)偶联DEAE-HCl：取洗涤后的海藻酸钙微胶珠，加入浓度为1-3mol/L的NaOH溶液搅拌，再加入浓度为0.5-2mol/L的DEAE-HCl溶液进行搅拌；所述海藻酸钙微胶珠的体积与NaOH溶液的体积和DEAE-HCl溶液的体积的比值为1:1-3:1-3；

(8)洗涤：除去多余的NaOH溶液和DEAE-HCl溶液，依次用无菌纯化水、0.1M盐酸、0.1mM盐酸、无Ca²⁺和Mg²⁺的PBS缓冲液洗涤，每次洗涤均以300rpm的转速搅拌8min后放出洗涤液，所用无菌纯化水、0.1M盐酸、0.1mM盐酸、无Ca2+、Mg2+PBS缓冲液与海藻酸钙微胶珠的体积比例均为1-3：1，制得湿润微载体；

(9)冻干：将步骤(8)所得到的微载体冻干得到微载体。

2.如权利要求1所述的间充质干细胞培养用可降解微载体的制备方法，其特征在于，步骤(2)、步骤(4)和步骤(6)中至少一个所述的用无菌纯化水洗涤具体操作方法为：以50-300rpm的转速搅拌5-10min后弃洗涤液去除多余液体，所述纯化水与海藻酸钙微胶珠的体积比例为1-3:1。

3.如权利要求1所述的间充质干细胞培养用可降解微载体的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述将所述海藻酸钙微胶珠浸泡在所述混合液中反应的反应条件为：温度为20-60℃，搅拌速度为50-300rpm，时间为30min-2h。

4.如权利要求1所述的间充质干细胞培养用可降解微载体的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述的反应条件如下：中和温度为40℃-60℃，搅拌速度为50-300rpm，中和时间为2-3h。

5.如权利要求1所述的间充质干细胞培养用可降解微载体的制备方法，其特征在于，步骤(7)所述两次搅拌的具体条件如下：搅拌速度为50-300rpm，搅拌温度为60-80℃，搅拌时间为0.5-2h。

6.如权利要求1所述的间充质干细胞培养用可降解微载体的制备方法，其特征在于，步骤(8)所述的洗涤方法如下：以50-300rpm的转速搅拌5-10min后弃洗涤液。