[发明专利]一种基于中枢神经系统髓鞘功能改变的精神分裂症动物模型的构建方法和应用

权利要求书

1.一种基于中枢神经系统髓鞘功能改变的精神分裂症动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)通过基因打靶技术在小鼠Tet1基因10-13号外显子两端插入方向相同的LoxP位点，在导入Cre重组酶的情况下，Cre酶通过识别LoxP位点，切除LoxP位点间的序列，得到Tet1^loxp/loxp小鼠打靶载体；

其中，小鼠Tet1基因ENSMUSG00000047146位于第10号的染色体上有13个外显子，其中第10-13号外显子编码催化结构域，即催化5hmC产生的关键酶活性区域；敲除该第10-13号外显子编码催化结构域后，Tet1基因成为编码缺失酶活性的截短体；

2)将Tet1^loxp/loxp小鼠打靶载体用限制性内切酶线性化，并通过电转染方法使其进入小鼠ES细胞核，利用同源重组原理获得Tet1基因两端带有LoxP序列的ES细胞；

3)采用PCR和Southern Blot法筛选发生同源重组的阳性细胞克隆，然后通过显微注射技术将筛选的阳性细胞克隆注射到小鼠囊胚腔中，参与到小鼠的胚胎发育；

4)选择毛色嵌合率在50％的雄性嵌合小鼠用于繁殖子代小鼠，并通过毛色鉴定和基因型鉴定获得LoxP插入的杂合子小鼠，即Tet1^loxp/+小鼠；

5)Tet1^loxp/+小鼠互相交配得到Tet1^loxp/loxp纯合小鼠后代，再将少突胶质细胞特异性Cre小鼠品系Olig1-Cre^+/-与Tet1^loxp/loxp纯合小鼠杂交，得到Tet1^loxp/loxp；Olig1-Cre^+/-小鼠，实现在少突胶质细胞特异性转录因子Olig1表达阳性的细胞中敲除Tet1基因，即构建得到基于中枢神经系统髓鞘功能改变的精神分裂症动物模型。

2.根据权利要求1所述的基于中枢神经系统髓鞘功能改变的精神分裂症动物模型构建方法，其特征在于，鉴定制备的Tet1^loxp/loxp；Olig1-Cre^+/-小鼠基因型通过PCR体系，所用引物包括：

Tet1：

上游引物:5’-CCCGTCGACAGT AGTATTTTGCCTGCCTGCAT-3’；

下游引物5’-AAAGCGGCCGCATCCTAAATAACCCAA CCACCAA-3’；

Olig1-Cre：

上游引物：5'-CGTTAGTGAAGGGCGCCCCGGGTCG-3’；

下游引物：5'-CGCTAGAGCCTGTTTTGCACGTTCACCGGC-3’。

3.采用权利要求1～2中任意一项所述的构建方法构建得到的基于中枢神经系统髓鞘功能改变的精神分裂症动物模型在筛选预防或治疗精神分裂症的药物中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，Tet1^loxp/loxp；Olig1-Cre^+/-小鼠出现典型的精神分裂症样性行为，表现为运功过度兴奋、认知障碍和感觉运动门控障碍。