[发明专利]基于抗原示踪快速测定单克隆抗体效价免疫荧光试纸条

说明书

本发明提供一种基于抗原示踪快速测定单克隆抗体效价免疫荧光试纸条，具有依次排列的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，荧光标记的菌喷涂于所述结合垫上，羊抗鼠抗体喷涂于所述硝酸纤维素膜上形成检测线，阳性血清或抗体喷涂于C线形成质控线。另外，本发明还提供了基于抗原示踪快速测定单克隆抗体效价免疫荧光试纸条在快速检测单克隆抗体效价中的应用。本发明的试纸条检测时灵敏度高、时间短。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种基于抗原示踪快速测定单克隆抗体效价免疫荧光试纸条。

背景技术

单克隆抗体主要是由效应B细胞分泌的，将B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，既保持了效应B细胞分泌特异性抗体的能力，同时也具有骨髓瘤细胞的无限增殖的能力。目前单克隆抗体按制备方式有杂交瘤单克隆抗体，重组单克隆抗体和噬菌体展示单克隆抗体等，这些建株制备单克隆抗体的方法各有优缺点，但有一个共同点是制备工艺繁琐，制备周期长，需要多次阳性测试筛选以及建株后的阳性测定。同时，对于获得的单克隆抗体，需要对其进行一个效价的测定，以便有一个更好的稀释指导范围，从而保证了抗体的使用。

目前，对单克隆抗体的筛选、效价的测定均依赖间接ELISA方法，该方法主要是将抗原固定在固相载体上，封闭，洗脱，与目标的抗体孵育，洗脱，与酶标二抗孵育，洗脱，形成抗原-抗体-酶标二抗的三元复合物，催化底物形成有色物质，产物的量与抗体的量直接相关，每次测定时间需要5h-24h。这种费时费力的测定方式，已经成为制约单克隆抗体制备及使用的重要瓶颈之一。

因此，在检测抗体的阳性及效价时，有必要设计一种利用抗原示踪的高灵敏度的试纸条。

发明内容

本发明是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种基于抗原示踪快速测定单克隆抗体效价免疫荧光试纸条。

本发明提供了一种基于抗原示踪快速测定单克隆抗体效价免疫荧光试纸条，具有依次排列的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，具有这样的特征：其中，荧光标记的菌喷涂于结合垫上，羊抗鼠抗体喷涂于硝酸纤维素膜上形成检测线，阳性血清或抗体喷涂于C线形成质控线。

本发明还提供了基于抗原示踪快速测定单克隆抗体效价免疫荧光试纸条在快速检测单克隆抗体效价中的应用。

发明的作用与效果

根据所涉及的本发明的基于抗原示踪快速测定单克隆抗体效价免疫荧光试纸条，能够进行便捷、快速的检测抗体的阳性及效价，可大大提高单克隆抗体筛选和制备的效率，能够使高质量的抗体得到快速的应用。

附图说明

图1是本发明实施例中基于抗原示踪快速测定单克隆抗体效价结构图；

图2是本发明实施例中抗原不同标记方法测试结果图；

图3是本发明实施例中不同浓度FITC标记革兰氏阴性菌大肠杆菌O157:H7流式细胞仪测试结果图；

图4是本发明实施例中不同浓度FITC标记革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌流式细胞仪测试结果图；

图5是本发明实施例中标记后的革兰氏阴性菌大肠杆菌O157:H7在荧光显微镜下观察的结果图；

图6是本发明实施例中结合垫喷涂不同浓度荧光标记的菌的测试结果图；

图7是本发明实施例中基于抗原示踪荧光试纸条测试血性大肠杆菌O157:H7细胞上清中抗体效价结果图；

图8是本发明实施例中基于抗原示踪荧光试纸条测试出血性大肠杆菌O157:H7腹水中抗体效价结果图；

图9是本发明实施例中基于抗原示踪荧光试纸条测试出血性大肠杆菌O157:H7纯化后的抗体效价结果图。

具体实施方式