[发明专利]一种人类免疫缺陷病毒HIV-1的检测试剂盒

说明书

本发明公开一种人类免疫缺陷病毒HIV‑1的检测试剂盒，属于HIV分子生物检测技术领域。该试剂盒包括上游引物、下游引物、与引物配合使用的探针、阴性对照模板、阳性对照模板、标准品模板、RAA等温核酸扩增试剂、10x NEB Buffer2.1、40U/μL的RNase抑制剂、2M的DTT及2μM的EnGen Lba Cpf1核酸酶。采用试剂盒进行检测，反应速度快，整个检测过程不到2个小时；且只需要提取病毒DNA，操作步骤少且简便，能够有效地避免污染；同时，检测灵敏度高，能检测到10拷贝的病毒DNA，大大提高工作效率，降低了检测成本。

技术领域

本发明涉及一种人类免疫缺陷病毒HIV-1的检测试剂盒，属于HIV分子生物学检测技术领域。

背景技术

艾滋病(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)是一种危害极大的病毒性传染疾病，严重威胁着全球公共卫生。目前全世界约有3700万人已感染人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)，且每年新增加约180万感染者。我国自1989年在云南省瑞丽市首次发现吸毒人群感染HIV/AIDS以来，吸毒途径一直是我国感染艾滋病的主要途径之一，特别是在注射吸毒人群中由于共用针具、共用棉球等高危行为的存在，使其更易成为艾滋病的受累人群。我国吸毒人群及其艾滋病感染分布多与地理位置分布有关。由于毗邻著名的毒品生产基地“金三角”，云南省的吸毒现象较内地更普遍。

高效抗逆转录病毒疗法(highly active antiretroviral therapy,HAART)能有效地控制血浆中HIV-1病毒复制，抑制HIV-1病毒到不可检测水平，但是ART不能清除潜伏病毒库。潜伏病毒库是ART治疗中断后病毒再爆发的主要来源，是清除潜伏的HIV-1病毒的主要障碍。在AIDS的SIV(simian immunodeficiency virus)模型中证实在病毒感染后1-3天内就建立了病毒库，因此即使HIV-1病毒感染3天后就使用HAART治疗，也不能阻止持续感染的建立。因此，需要开发新型的HIV病毒潜伏库检测手段，为“功能”治愈HIV/AIDS患者打下技术基础。

与蛋白免疫检测相比，基于分子(核酸)的诊断检测有众多优势，特别是在检测灵敏度和特异型方面。但是，传统的核酸检测(nucleic acid-based tests，NATs)需要处理大量的样本、训练有素的操作人员及专门的设备。现场检测(on-site detection)病原体和其他疾病标志物可以提高医疗质量，降低医疗成本。HIV诊断的金标准是DNA PCR，DNA PCR能检测存在于周边血单核细胞中的前病毒DNA。即使当HIV病毒载量被抑制到很低的水平，HIVDNA检测也是可靠的。不幸的是，HIV DNA PCR不适合在贫困地区进行，因为PCR需要昂贵的设备、电力、专门的实验室空间及训练有素的技术人员。因此，需要一种基于DNA检测的即时(point-of-care)HIV检测技术，它可以快速提供结果，使更多的患者能够了解他们的HIV状况并更快地开始治疗。与其它常规的分子方法相比，等温扩增技术具有快速、操作简单及花费低的优点，非常适合于临床应用。

目前，病毒感染诊断一般包括病毒分离和鉴定、病毒核酸和抗原的直接检出以及特异性抗体的检测，不仅耗时长，而且对医疗设备和操作人员的专业水准要求很高。因此，如果能开发出一种不需依赖贵重设备和医护人员的智能诊断设备显得非常重要，尤其对于病毒感染经常肆意横行的发展中国家。常规的HIV感染检测方法是通过酶联免疫检测(ELISA)来检测人血清或血浆中是否存在抗病毒抗体；因为机体需要一定的时间才能产生特异性免疫反应，因此在病毒感染的前1～3个月(“窗口期”)中，可能根本检测不到抗体；而检测病毒的核酸可以大大缩短检测的窗口期。

发明内容