[发明专利]用于鉴定嗜虫书虱的LAMP引物组及其应用

说明书

本发明公开了用于鉴定嗜虫书虱的LAMP引物组及其应用。LAMP引物组由引物‑F3、引物‑B3、引物‑FIP和引物‑BIP组成，核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1—SEQ ID NO:4所示。LAMP引物组可应用于鉴定待测书虱是否为或疑似为嗜虫书虱，也可应用于检测待测样本中是否含有或疑似含有嗜虫书虱。采用LAMP引物组鉴定嗜虫书虱，具有高特异性和高灵敏度，可以实现简便、快速、准确检测。本发明具有重大的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及用于鉴定嗜虫书虱的LAMP引物组及其应用。

背景技术

嗜虫书虱隶属于啮虫目(Psocodea)，书虱科(Liposcelididae)，书虱属(LiposcelisMotschulsky，1852)，世界广泛分布。书虱个体微小，成虫体长一般为0.6-1.5mm。目前，全球已知的书虱属昆虫共计126种，其中我国已报道28种。世界常见的仓储书虱主要包括以下10种：暗褐书虱(L.brunnea)、嗜虫书虱(L.entomophila)、嗜卷书虱(L.bostrychophila)、小眼书虱(L.paeta)、无色书虱(L.decolor)、啮书虱(L.corrodens)、皮氏书虱(L.pearmani)、红书虱(L.rufa)、三色书虱(L.tricolor)和虚伪书虱(L.mendax)。

仓储书虱食性广，喜食粮食的胚部与破碎颗粒，喜温暖潮湿，活动能力强，繁殖速度快。在适宜条件下，仓储书虱种群极易扩张而爆发成灾。仓储书虱大量发生时会造成粮食局部发热发潮引起霉变，对原粮的储藏造成极大威胁，带来严重的污染与经济损失。书虱由于体型微小，易藏于缝隙中，可通过国际贸易随着粮食、皮张、牧草等在世界范围内进行传播，我国曾多次在口岸截获过书虱。因此，如何有效快速、准确地鉴别出书虱的种类，对于仓储物保护领域的害虫监测和植物检疫领域的害虫鉴定等，显得尤为重要。

书虱的鉴定方法主要采用传统的形态鉴定和分子鉴定技术。由于书虱个体微小，需要专业的形态学知识储备，进行形态鉴定困难。现有的PCR分子鉴定技术虽然可实现快速、准确的鉴定，但需昂贵的仪器设备，鉴定成本高，不适于在基层部门中推广应用。

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是利用一种具有链置换活性和瀑布式核酸扩增功能的Bst DNA聚合酶，在等温条件下进行核酸的变性和自动循环的链置换核酸扩增反应。LAMP针对靶序列的6个区域设计4条特异引物，利用具备链置换功能的DNA聚合酶在恒定温度下不断复制扩增DNA。为了提高反应效率，可在反应体系中添加两条环引物，使之分别与茎环结构结合，启动链置换合成，循环复制。LAMP是一种简便高效的核酸恒温扩增技术，可以在短时间内大量扩增反应产物，具更高灵敏度，且操作简便，无需特殊仪器，检测结果可由肉眼观察判断，适于基层部门推广应用。LAMP中，引物是决定检测结果灵敏度和特异性的关键因素。

发明内容

本发明的目的是鉴定嗜虫书虱。

本发明首先保护引物组，可包括引物-F3、引物-B3、引物-FIP和引物-BIP；

所述引物-F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述引物-B3的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述引物-FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

所述引物-BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

所述引物组中，所述引物-F3、所述引物-B3、所述引物-FIP和所述引物-BIP的摩尔比具体可为1:1:8:8。

上述任一所述引物组具体可由所述引物-F3、所述引物-B3、所述引物-FIP和所述引物-BIP组成。

本发明还保护上述任一所述引物组在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途可为(y1)或(y2)：