[发明专利]ACE2受体保护性合成短肽在新型冠状病毒感染的应用

权利要求书

1.ACE2受体保护性合成短肽在新型冠状病毒感染的应用，包括对所有合成并且修饰的短肽进行计算机模拟短肽-ACE2受体蛋白结合对接分析，以筛选出与人ACE2受体蛋白亲和力最高的短肽，血管紧张素转化酶II（ACE2）受体保护短肽的氨基酸顺序及其赖氨基酸和C-16脂肪酸修饰后在预防和治疗新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染的应用，同时，从分子、细胞及动物水平检测了这些融合的短肽能高效和特异性靶向阻断SARS-CoV-2-S蛋白RBD与ACE2受体相互作用，最终，以鼻内给药方式予ACE2保护性短肽阻止了病毒侵入靶细胞，合成短肽为：

C6KACE2-GZ1： KKKKKK[C-16]DKFNHEADELFY

CACE2-GZ14： DK[C-16]FNHEADELFYMYPLQEIQNLTVGKGDFR

CACE2-GZ8： DK[C-16]FNHEADELFY

CACE2-GZ13： DK[C-16]FNHEADELFYMYPLQEIQNLTV

C6KACE2-GZ7: KKKKKK[C-16]DKFNHEADELFYMYPLQEIQNLTVGKGDFR

CACE2-GZ10： GK[C-16]GDFR

C6KACE2-GZ3： KKKKKK[C-16]GKGDFR

C6KRBD-GZ28 KKKKKK[C-16]VEGFNCYFPLQS

(KKKKKK[Pal]VEGFNCYFPLQS)

C6KRBD-GZ26 KKKKKKYK[C-16]YRYLRHGKLR (KKKKKKYK[Pal]YRYLRHGKLR)

C6KRBD-GZ5 [C-16-]KKKKKKYLYRLF ([Pal]KKKKKKYLYRLF)

进一步，通过不同蛋白和/或脂肪酸修饰短肽，获得SARS-CoV-2不同阻断强度候选库，并在体外模型中测试不同修饰短肽对SARS-CoV-2的阻断效果；

进一步，采用人源ACE2受体（hACE2）转基因小鼠模型，在体内模型中测试不同修饰的短肽对SARS-CoV-2的阻断作用；

进一步，分子水平研究C6KRBD-GZ5、C6KRBD-GZ26、C6KRBD-GZ28和C6K（对照）合成短肽在无细胞系统中是否能抑制重组SARS-CoV-2-S 蛋白RBD与ACE2受体结合；

进一步，在无细胞系统中首先确认重组SARS-CoV-2-S 蛋白RBD与人ACE2受体的结合情况重组SARS-CoV-2-S 蛋白（nS蛋白），将其与人重组ACE2受体蛋白于37℃孵育0.5-4小时，然后与鼠或兔抗人ACE2抗体在4℃进行免疫沉淀孵育5-15小时，通过WB检测nS蛋白与ACE2受体结合情况。

2.根据权利要求1所述的ACE2受体保护性合成短肽在新型冠状病毒感染的应用，其特征是：所述的无细胞系统中确认C6KRBD-GZ5、C6KRBD-GZ26和C6KRBD-GZ28合成短肽与人重组ACE2受体蛋白的结合情况将合成的短肽（包括对照C6K短肽）分别与人ACE2受体蛋白于37℃孵育0.5-2.5小时，然后与鼠或兔抗人ACE2抗体在4℃进行免疫沉淀孵育5-15小时，通过WB检测每一种合成短肽和ACE2受体结合情况。

3.根据权利要求1或2所述的ACE2受体保护性合成短肽在新型冠状病毒感染的应用，其特征是：所述的无细胞系统中进一步确认C6KRBD-GZ5、C6KRBD-GZ26和C6KRBD-GZ28合成短肽分别竞争性抑制重组SARS-CoV-2-S 蛋白RBD与ACE2受体结合情况在浓度均为100 nM的合成短肽和重组nS蛋白情况下，将每一种合成短肽（包括C6K对照短肽）分别与重组nS蛋白和人ACE2受体同时在37℃孵育0.5-1.5小时，然后与鼠或兔抗人ACE2抗体在4℃进行免疫沉淀孵育5-15小时，通过WB检测每一种短肽和ACE2受体蛋白结合情况。