[发明专利]一种PARP-1浓度的检测方法及其应用

说明书

本发明提供一种PARP‑1浓度的检测方法及其应用，属于生物分析技术领域。其中，检测方法包括：合成金纳米棒，合成AuNPs‑DNA分离体系，在AuNPs‑DNA分离体系中加入NAD⁺、含MoO₄^2‑的酶反应缓冲液以及待测PARP‑1进行反应。将反应后溶液的上清液加入至金纳米棒中，并加入KI，H₂O₂和酸性缓冲液进行反应，对反应后的溶液进行检测，以得到待测PARP‑1的浓度。本发明通过降低KI和H₂O₂刻蚀金纳米棒的催化效率，使溶液的紫外‑可见峰发生明显蓝移，溶液的颜色也由浅蓝色变成棕色，可通过肉眼简单识别，极大地简化了操作过程，缩短了检测时间，无复杂的操作步骤、无需任何大型仪器。并且，本发明可将该方法应用于对人体细胞中的PARP‑1进行检测，具有较高的选择性和实际应用价值。

技术领域

本发明属于生物分析技术领域，具体涉及一种PARP-1浓度 的检测方法及其一种PARP-1浓度检测方法的应用。

背景技术

聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)是真核生物中存在的一类 蛋白质家族，PARP-1作为PARP家族的一员，在DNA复制，转 录调控和碱基切除修复中起着至关重要的作用，同时，PARP-1也 是细胞对DNA损伤反应的重要组成部分，因此是被研究最为广泛 的PARP。其中，PARP-1是一种分子量为113kDa的酶，具有三 个功能域：一个包含两个锌指基序的N端DNA结合域；一个包 含蛋白质-蛋白质相互作用界面的中央自修饰域，也存在于其他与 维持基因组完整性有关的酶和因子中；以及涉及聚(ADP-核糖) 合成的C端催化结构域。PARP-1在与受损DNA或者dsDNA结 合后被激活，并催化裂解烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺)为烟酰 胺和ADP-核糖，其中ADP-核糖部分(50-200个分子)以线性或 支链聚合物[聚(ADP-核糖)(PAR)]依附于受体蛋白质上，形成的聚 合物PAR含有大量负电荷的磷酸根基团裸露在支链上。

尽管PARP-1作为肿瘤标志物之一已经为人们所熟知，但是 由于其本身的性质，在检测方法上比较单一，研究较少，传统使 用较多的是酶免疫测定(ELISA)和放射性标记方法，因此，有必 要提出一种新的检测方法，基于金纳米棒可视化、无标记的比色 探针来检测PARP-1活性的方法，省去许多繁琐的标记步骤。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供 一种PARP-1浓度的检测方法以及一种PARP-1浓度检测方法的应 用。

本发明的第一方面，提供一种PARP-1浓度的检测方法，包 括：

合成金纳米棒；

合成AuNPs-DNA分离体系；

在所述AuNPs-DNA分离体系中加入NAD⁺、含MoO₄^2-的酶 反应缓冲液以及待测PARP-1进行反应；

将反应后溶液的上清液加入至所述金纳米棒中，并加入KI， H₂O₂和酸性缓冲液进行反应，对反应后的溶液进行检测，以得到 所述待测PARP-1的浓度。

可选的，所述合成AuNPs-DNA分离体系，包括：

将金纳米粒子、HS-ssDNA1与NaCl混合反应18h～24h，之后， 加入HS-PEG和ssDNA2进行反应，离心处理后，以得到所述 AuNPs-DNA分离体系。

可选的，所述将金纳米粒子、HS-ssDNA1与NaCl混合反应 18h～24h，之后，加入HS-PEG和ssDNA2进行反应，离心处理后， 以得到所述AuNPs-DNA分离体系，包括：