[发明专利]水稻氨基酸转运子OsAAP7基因及其应用

权利要求书

1.一种水稻氨基酸转运子OsAAP7基因在调控水稻籽粒中氮含量中的应用，其特征在于，通过降低OsAAP7基因的表达水平，增加水稻籽粒中的氮含量；所述水稻氨基酸转运子OsAAP7基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的的应用，其特征在于，应用方法包括以下步骤：

S1、扩增所述OsAAP7基因的编码区的靶标序列，获得扩增片段，将所述扩增片段连接至表达载体，获得RNAi表达载体；

S2、将所述RNAi表达载体通过农杆菌介导法导入水稻中，获得水稻籽粒氮含量增加的OsAAP7 RNAi水稻转基因系。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述OsAAP7基因的编码区的靶标序列如SEQ ID NO.4所示。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，扩增所述OsAAP7基因的编码区序列的引物为：RNAi-AAP7-For1、RNAi-AAP7-Rev1、RNAi-AAP7-For2、RNAi-AAP7-Rev2，

所述RNAi-AAP7-For1的序列如SEQ ID NO.5所示；

所述RNAi-AAP7-Rev1的序列如SEQ ID NO.6所示；

所述RNAi-AAP7-For2的序列如SEQ ID NO.7所示；

所述RNAi-AAP7-Rev2的序列如SEQ ID NO.8所示。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述S1步骤具体为：

S1-A1、以水稻cDNA为模板，以RNAi-AAP7-For1、RNAi-AAP7-Rev1为引物进行PCR扩增得到正向RNAi片段，将所述正向RNAi片段连接至中间载体获得重组载体1；

S1-A2、以水稻cDNA为模板，以RNAi-AAP7-For2、RNAi-AAP7-Rev2为引物进行PCR扩增得到反向RNAi片段，将所述反向RNAi片段连接至重组载体1上获得重组载体2；

S1-A3、将所述重组载体2连接至表达载体中，获得RNAi表达载体。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述中间载体为pBS质粒，所述正向RNAi片段和反向RNAi片段分别连接在所述pBS质粒中Rice intron位点的两端；

所述表达载体为pHB载体。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述表达载体为pHB-PromoterOsNAP，所述pHB-PromoterOsNAP利用水稻衰老诱导基因OsNAP的启动子序列，将表达载体pHB中原来的35S启动子进行替换，获得衰老诱导启动表达的表达载体pHB-PromoterOsNAP。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述pHB-PromoterOsNAP采用以下方法制备：

S1-B1、扩增OsNAP的启动子序列片段；

S1-B2、将所述OsNAP的启动子序列片段连接至pHB载体中，获得由OsNAP基因启动子驱动的重组表达载体pHB-PromoterOsNAP。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，扩增所述OsNAP的启动子序列片段的引物为：Pro-NAP-For1和Pro-NAP-Rev1，所述Pro-NAP-For1的序列如SEQ ID NO.13所示；所述Pro-NAP-Rev1的序列如SEQ ID NO.14所示。