[发明专利]一种缀合物及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种缀合物及其制备方法和应用，属于抗肿瘤糖疫苗研制技术领域。本发明提供的一种缀合物，其含有双重激动剂与糖抗原Tn，所述双重激动剂为TLR4受体激动剂和NKT细胞激动剂，所述TLR4受体激动剂为单磷酸化的脂质A，所述NKT细胞激动剂为α‑半乳糖神经酰胺类似物。本发明所述的缀合物作为疫苗，能同时激活TLR4受体与NKT细胞，引起更强的针对糖抗原Tn的免疫反应，产生具有更高滴度、高亲和力和具有记忆力的T细胞调节免疫反应，从而达到特异性杀死肿瘤细胞的目的。

技术领域

本发明涉及一种缀合物及其制备方法和应用，尤其涉及一种双重激动剂与糖抗原Tn的缀合物及其制备方法和应用，所述双重激动剂为TLR4受体激动剂和NKT细胞激动剂，属于抗肿瘤糖疫苗研制技术领域。

背景技术

肿瘤相关的糖抗原(TACAs)在多种肿瘤细胞中有过量表达，其糖蛋白疫苗正处于临床研究中，具有较好的发展前景。其中Thomsennouveau(Tn)抗原在乳腺癌、前列腺癌、肺癌等恶性肿瘤细胞表面均异常过量表达，是糖抗原肿瘤疫苗设计的优秀靶点。肿瘤相关的糖抗原(TACAs)一般属于T细胞非依赖性抗原，只产生低亲和力的IgM，具有免疫原性差和免疫耐受等缺点。因此，目前抗肿瘤糖疫苗面临的主要挑战是如何克服糖抗原的免疫耐受，增强其免疫原性，使机体产生高亲和力的IgG抗体和免疫记忆，从而达到杀死肿瘤细胞的目的。经典的策略是将糖抗原与载体蛋白缀合来增强其免疫原性，但糖蛋白疫苗有偶联位点不确定、偶联率不稳定、组成成分复杂等缺点。

细菌脂多糖(Lipidpolysacchrides，LPS)疏水部分的Lipid A是Toll样受体4(TLR4)的激动剂，能靶向地结合TLR4并产生免疫反应，但其毒性过强。研究发现去掉LipidA结构中1位磷酸(反应式如下所示)后的Monophosphoryl lipid A(MPLA)依然能靶向地与TLR4结合，毒性明显降低而活性变化不明显(MicrobesInfection,2002,4(9):915-926.)。其作为内嵌佐剂与多种糖抗原结合来制备的抗肿瘤糖缀合物疫苗MPLA-Golob H和MPLA-STn和MPLA-GM2，在无外加佐剂的情况下，都能在小鼠体内更快速地产生高滴度的IgG抗体(Chemical Science,2015,6:7112；Scientific reports,2017,7:11403；BiomolecularChemistry,2014,12:3238)，

α-半乳糖神经酰胺类似物(KRN7000)，是从一种海绵中分离出的天然α-GalGSL类似物，能激活NKT细胞产生免疫反应。目前，KPN7000对非小细胞肺癌患者、恶性实体瘤综合治疗均进入Ⅱ期临床研究，其作为内嵌佐剂缀合糖抗原的全合成疫苗KRN7000-Tn，KRN7000-sTn，无需外部佐剂的条件下，在小鼠体内能更快速地产生特异性免疫应答，同时激活NKT细胞，高效地将IgM抗体同种型转换成IgG(Organic Letters,2017,19:456；Journal of medicinal chemistry,2018,61:4918.)

为了解决上述糖蛋白疫苗的缺点，本发明选择有发展潜力TACAs中的Tn为研究靶点，选用TLR4激动剂MPLA和NKT细胞激动剂KRN7000类似物作为内源性佐剂，制备一种含有TLR4受体和NKT细胞的双重激动剂(MPLA和KRN7000)与Tn缀合的三组分疫苗(MPLA-Tn-KRN7000)。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种双重激动剂与糖抗原Tn的缀合物，所述双重激动剂为TLR4受体激动剂单磷酸化的脂质A(MPLA)和NKT细胞激动剂α-半乳糖神经酰胺类似物(KRN7000)。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种缀合物，其特征在于，所述缀合物含有双重激动剂与糖抗原Tn，所述双重激动剂为TLR4受体激动剂和NKT细胞激动剂，所述TLR4受体激动剂为单磷酸化的脂质A，所述NKT细胞激动剂为α-半乳糖神经酰胺类似物；