[发明专利]一种角膜微口袋手术实验中微丸的制备方法及应用

权利要求书

1.一种角膜微口袋手术实验中微丸的制备方法，其特征在于，包括以下过程：

（1）、生长因子的配置和Matrigel的分装过程

（1-1）、VEGF的配置：VEGFA粉末溶解于无菌水中，储存浓度为100ug/ml，置于-80℃保存；

（1-2）、Heparin的配置Heparin用无菌水溶解，储存浓度为25ku/ml，置于-20℃保存；

（1-3）、将Matrigel在冰盒上操作分装，1ml/管，置于-80℃冰箱保存；

（2）、Matrigel的准备过程

（2-1）、根据实验需要，将Matrigel从-80℃冰箱取出放置到4℃过夜，使其充分溶解为液态；

（2-2）、第二天，将Matrigel 与DMEM进行1:1混合均匀，然后，将VEGFA和Heparin加入到混合物中，充分混匀；

（2-3）、VEGFA用量为100ng/微丸，Heparin的浓度为30U/ml；

（3）、 微丸的制作过程

（3-1）、准备好无菌10cm dish放入无菌操作台上，调节10ul移液器至8ul，吸取Matrigel 配置好的混合液8ul，滴在无菌培养皿中，形成一个圆滴；然后将皿盖盖好放入，做好标识，放置37度培养箱孵育1-2小时；

（3-2）、孵育后，放置到-20℃过夜，待手术时用无菌刀片刮下微丸。

2.根据权利要求1所述的一种角膜微口袋手术实验中微丸的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）所制作的微丸可保存在-20°C冰箱中3个月，待使用时将10cm dish中的微丸刮下即可。

3.根据权利要求1所述的一种角膜微口袋手术实验中微丸的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的混合物始终保持在冰上，且无菌操作。

4.角膜微口袋手术实验中微丸在血管生成和淋巴管生成研究中的应用，其特征在于，在小鼠实验研究中，小鼠麻醉状态下，在解剖显微镜下，将微丸植入到角膜中，植入后的第5-7天，用裂隙灯显微镜进行拍照观察血管生成情况，可观察到小鼠角膜的血管生成情况。