[发明专利]鉴定金圆2号小冬瓜杂种种子纯度的SSR分子标记引物

权利要求书

1.一种鉴定金圆2号小冬瓜杂种种子纯度的SSR分子标记引物，其特征在于，所述SSR分子标记引物为XD-18引物，所述XD-18引物序列为：上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种如权利要求1所述SSR分子标记引物在鉴定金圆2号小冬瓜杂种种子纯度中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述SSR分子标记引物鉴定的金圆2号小冬瓜杂种种子母本为YMY-24-1，父本为YO-16-1。

4.一种使用如权利要求1所述SSR分子标记引物鉴定金圆2号小冬瓜杂种种子纯度的方法，其特征在于，步骤如下：

(1)取金圆2号小冬瓜(F₁)种子、YMY-24-1(母本)种子、YO-16-1(父本)种子，然后将各种子培养至子叶展开用于单粒提取DNA样品，用CTAB法对各样品提取基因组DNA，并采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的纯度和完整性；

(2)PCR扩增及电泳分析：以步骤(1)提取的DNA为模板，以SSR分子标记引物进行PCR扩增，PCR扩增后的DNA采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，并进行银染检测和条带记录；

(3)SSR分子标记引物对YMY-24-1(母本)扩增出200bp和170bp的特征谱带，对YO-16-1(父本)扩增出180bp和150bp的特征谱带，F₁代鉴定结果中具有父本和母本特征带的即为真杂种，而只具有母本或者父本特征带的后代为假杂种或自交种。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(1)中以改良的CTAB法提取各样品的DNA。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(1)采用0.8％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA的纯度和完整性；步骤(2)中PCR扩增后的DNA采用8％聚丙烯酰胺凝胶电泳。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)的PCR体系为：PCR反应体系20μL，包括10μL的2×Taq Master Mix for PAGE，2μL的DNA模板(50ng·μL^-1)，2μL正、反向SSR分子标记引物(50ng·μL^-1)，6μL的ddH₂O。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)的PCR扩增程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s；56℃退火45s；72℃延伸1min 30s；循环35次，最后72℃再延伸7min，4℃保存。