[发明专利]长链非编码RNAMYC-AS1的FISH检测引物、试剂盒

权利要求书

1.一种长链非编码RNA MYC-AS1的FISH检测引物组，其特征在于，所述引物组由序列为SEQ ID NO.1-10所示的10条引物组成；其中：

SEQ ID NO.1为：aacgagctaaaacggagctttt；

SEQ ID NO.2为：gagaatgtcaagaggcgaacac；

SEQ ID NO.3为：tcagcaacaaccgaaaatgcac；

SEQ ID NO.4为：aagagggtcaagttggacagtg；

SEQ ID NO.5为：aaaaggtcagagtctggatcac；

SEQ ID NO.6为：tcgatgttgtttctgtggaaaa；

SEQ ID NO.7为：atgtaaccttgctaaaggagtg；

SEQ ID NO.8为：atttgtacagcattaatctggt；

SEQ ID NO.9为：agacctttctaacgtattcatg；

SEQ ID NO.10为：tctttggggagataattttgtc。

2. 利用权利要求1所述的引物组在制备长链非编码RNA MYC-AS1的FISH检测试剂盒中的应用。

3. 一种长链非编码RNA MYC-AS1的FISH检测试剂盒，包括FISH荧光探针、杂交液和染色液；其特征在于，所述探针的序列如SEQ ID NO.1-10所示；其中：

SEQ ID NO.1为：aacgagctaaaacggagctttt；

SEQ ID NO.2为：gagaatgtcaagaggcgaacac；

SEQ ID NO.3为：tcagcaacaaccgaaaatgcac；

SEQ ID NO.4为：aagagggtcaagttggacagtg；

SEQ ID NO.5为：aaaaggtcagagtctggatcac；

SEQ ID NO.6为：tcgatgttgtttctgtggaaaa；

SEQ ID NO.7为：atgtaaccttgctaaaggagtg；

SEQ ID NO.8为：atttgtacagcattaatctggt；

SEQ ID NO.9为：agacctttctaacgtattcatg；

SEQ ID NO.10为：tctttggggagataattttgtc。

4.一种分析MYC-AS1与目标蛋白共定位的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）细胞培养；

（2）对经步骤（1）培养的细胞进行长链非编码RNA MYC-AS1 FISH探针检测：包括细胞固定、细胞通透和MYC-AS1探针检测；

（3）细胞二次固定：加入4%多聚甲醛室温固定20分钟；PBS洗涤三次，每次5分钟；

（4）细胞二次通透：加入0.5% Triton X-100室温通透15分钟；PBS洗涤三次，每次5分钟；

（5）封闭：加入2% BSA室温封闭30分钟；PBS洗涤三次，每次5分钟；

（6）一抗孵育：加入稀释至工作浓度的目标蛋白，37℃孵育1小时；PBS洗涤三次，每次5分钟；

（7）二抗孵育：避光条件下加入稀释至工作浓度Alexa Fluor 488标记的山羊抗兔IgG，37℃孵育40分钟；PBS洗涤三次，每次5分钟；

（8）DAPI染色：避光条件下加入DAPI染色液染色10分钟；PBS洗涤三次，每次5分钟；

（9）封片：避光条件下，从孔中小心取出细胞爬片，用封片剂（如指甲油）将其固定于载玻片上；

（10）共聚焦显微镜检测：使用Leica SP8共聚焦显微镜进行观察拍照。