[发明专利]检测样品中聚集体颗粒在目标粒径下浓度的非标记方法

权利要求书

1.一种检测样品中聚集体颗粒在目标粒径下浓度的方法，其特征在于，该方法包括：

（1）在流式细胞仪上分别采用FSC通道和SS C通道检测所述样品在激光激发下的前向散射光和侧向散射光，获得前向光散射强度与不溶性聚集体颗粒数量之间关系的样品光散射图谱；

（2）根据不同粒径下的标准微球的标准光散射图谱，获得目标粒径下的光散射强度区间，根据所述光散射强度区间和所述样品光散射图谱，确定样品中在目标粒径下的聚集体颗粒的数量，从而获得样品中在目标粒径下的聚集体颗粒的浓度；

其中，目标粒径为0.1-1μm区间中任一区间粒径或任一粒径的情况下，所述FSC通道检测的电压为405-435V，SSC通道的检测电压为290-310V，SSC阈值600-1200；目标粒径为1μm以上区间中任一区间粒径或任一粒径的情况下，所述FSC通道检测的电压为175-205V，SSC通道的检测电压为120-140V，SSC阈值600-1200；

其中，所述标准光散射图谱通过与样品检测条件相同的条件下获得。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述FSC通道包括FSC直接通道和FSC旁侧通道，在对所述前向散射光进行FSC通道检测前，该方法还包括对所述前向散射光进行分光，使得所述FSC直接通道收集并检测与激光光轴夹角为0.5°至15°和-15°至-0.5°的前向散射光以对目标粒径为1μm以上区间中任一区间粒径或任一粒径的情况下进行检测，FSC旁侧通道收集并检测与激光光轴夹角为15°-30°的范围内的前向散射光以对目标粒径为0.1-1μm区间中任一区间粒径或任一粒径的情况下进行检测；或者

在样品液流和FSC通道之间设置NA＞1的数字光圈；或者

在FSC通道上使用收集角度为2°至18°的NanoView前向角散射检测器模块。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在采用FSC通道检测所述样品在激光激发下的前向散射光前，该方法还包括使用带通透镜对所述前向散射光进行过滤；

其中，目标粒径为0.1-1μm区间中任一区间粒径或任一粒径的情况下，所述带通透镜的通过波长为385-425nm；目标粒径为1μm以上区间中任一区间粒径或任一粒径的情况下，所述带通透镜的通过波长为468-508nm；和/或

在采用SSC通道检测所述样品在激光激发下的侧向散射光前，该方法还包括使用带通透镜对所述侧向散射光进行过滤；

其中，目标粒径为0.1-1μm区间中任一区间粒径或任一粒径的情况下，所述带通透镜的通过波长为385-425nm；目标粒径为1μm以上区间中任一区间粒径或任一粒径的情况下，所述带通透镜的通过波长为468-508nm。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，目标粒径为0.1-1μm区间中任一区间粒径或任一粒径的情况下，激光的波长为400-410nm，能量为150-200mW，光斑长轴为9-11μm；

目标粒径为1μm以上区间中任一区间粒径或任一粒径的情况下，激光的波长为485-490nm，能量为18-22mW，光斑长轴为115-125μm。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，目标粒径为0.1-1μm区间中任一区间粒径或任一粒径的情况下，激光的波长为400-410nm，能量为150-200mW，光斑长轴为9-11μm；

目标粒径为1μm以上区间中任一区间粒径或任一粒径的情况下，激光的波长为485-490nm，能量为18-22mW，光斑长轴为115-125μm。

6.根据权利要求1、2或5所述的方法，其中，所述标准微球的标准光散射图谱的峰高为样品光散射图谱中最高峰高的1/5-1/2。

7.根据权利要求1、2或5所述的方法，其中，所述标准微球为粒径溯源的乳胶微球。

8.根据权利要求3所述的方法，其中，所述标准微球的标准光散射图谱的峰高为样品光散射图谱中最高峰高的1/5-1/2。