[发明专利]SVA 3C蛋白在促进猪源病毒复制中的应用

说明书

本发明属于生物技术领域，通过实验研究首次发现，SVA 3C基因编码的蛋白能够作为病毒复制增强剂，显著促进包括弱毒疫苗株、灭活疫苗病毒株在内的猪源病毒的复制。这很好的解决了目前在生产和实践中遇到的病毒产量低、疫苗免疫原性低的问题。本发明不仅为揭示病毒混合感染机制提供新方向，还可将SVA 3C蛋白应用于提高生产实践中病毒的产量，更有助于优化相关基因工程活疫苗以及活病毒疫苗载体的构建策略，提高载体疫苗免疫活性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及SVA 3C蛋白在促进猪源病毒复制中的应用。

背景技术

养猪业一直是我国农业经济的主导产业之一，国民日益增长的猪肉消费内需以及食品安全和环保方面出台的新标准把我国生猪养殖业快速推向了利于规范化管理的高度集约化养殖模式，但随之而来的是猪病预防控制方面的巨大压力。

猪A型塞内卡病毒(Senecavirus A，SVA)是一种无囊膜包被的单股正链RNA病毒，它属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)，是Senecavirus属的唯一成员。SVA的基因组长度约为7.2kb，编码四个结构蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4)和八个非结构蛋白(L、2A、2B、 2C、3A、3B、3C、3D)。其中SVA 3C蛋白在病毒生命周期和病毒与宿主相互作用中起着至关重要的作用。有研究发现SVA 3C蛋白能诱导产生凋亡效应蛋白酶(Casp-3/-7)，进而切割宿主NF-κB-p65和Poly(ADP-ribose)聚合酶(PARP)，此过程对诱导细胞凋亡至关重要，这可能也是促进成熟病毒粒子从已感染细胞释放出来进而在细胞间扩散的机制。另外还有研究表明，虽然宿主会通过激活RIG-1抗病毒免疫应答来抵抗SVA的入侵，但SVA 3C蛋白可切割宿主的MAVS、TRIF和TANK蛋白，降低IRF3和IRF7的蛋白表达水平和磷酸化，从而使病毒逃逸宿主的天然抗病毒免疫应答。因此SVA 3C蛋白可能是SVA用来破坏宿主先天免疫的关键因子之一。

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)、猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus，PEDV)、猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine Acute DiarrheaSyndrome Coronavirus， SADS-CoV)、猪繁殖和呼吸综合征病毒(Porcine reproductiveand respiratory syndrome， PRRSV)等是常见的猪源病毒，基于除SADS-CoV外的这些病毒的多种减毒活疫苗被开发，然而毒力致弱往往导致疫苗免疫保护效果降低，弱毒疫苗接种对常见猪病的控制仍然有限。

现阶段限制疫苗保护效力的一个瓶颈是没有找到减毒和免疫原性之间的平衡点，因此，需要寻求维持猪体内疫苗株相对有效的复制方法，以在减毒和免疫原性之间达到最佳平衡。如何能够获得这样一种猪源病毒复制增强剂成为现有技术亟待解决的问题之一。

发明内容

针对上述技术问题，本发明首先解决的技术问题是提供一种病毒复制增强剂。

本发明的第二个目的是提供病毒复制增强剂在制备促进猪源病毒以及弱毒疫苗、灭活疫苗病毒株复制的生物制品中的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现：

一种病毒复制增强剂，所述增强剂包括SVA 3C基因或者相关的生物材料，所述SVA3C 基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

发明人通过前期流行病学调查中发现部分有SVA感染史的猪场极易爆发PRV疫情，给 PRV的防控带来巨大压力和困扰。通过进一步研究，发明人发现PRV与SVA混合感染时，PRV的拷贝数显著增加，且转染SVA各蛋白的表达质粒后发现SVA 3C蛋白显著增强了PRV 在细胞中的复制力，这为利用SVA 3C蛋白促进PRV基因工程活疫苗复制提供了理论依据。