[发明专利]一种蛋白探针及其在评估抗原抗体特异结合上的应用

说明书

本发明公开了一种蛋白探针及其在评估抗原抗体特异结合上的应用，所述蛋白探针的制备方法包括以下步骤：将机械探针针尖表面利用化学分子做修饰后，将探针针尖表面的化学基团与连接分子的一端共价键结合，连接分子的另一端则与蛋白共价键结合，从而形成具有特异性的蛋白探针；所述的蛋白是抗原蛋白或抗体蛋白。本发明根据不同的肿瘤(或病毒)类型研制特定的抗体(或抗原)蛋白探针，在选定的待检组织样本上，使蛋白探针上的抗体(或抗原)蛋白与待测样本上的肿瘤标志物(或病毒)结合，这个过程对样本制备要求简单，且操作简便，用时短。

技术领域

本发明属于生物分析领域，具体涉及一种蛋白探针及其在评估抗原抗体特 异结合上的应用。

背景技术

生物标志物通常被用以评价生物生理过程、病理过程或对药物干预反应的 特异性特征。生物标志物的检测在医学诊断、临床研究、新药开发方面具有重 要意义，尤其在肿瘤、病毒感染性疾病或其他疾病的诊断和治疗上具有重要价 值。以肿瘤研究为例，肿瘤细胞在发生和增殖过程中，会产生特定的肿瘤标志 物，能够直接反映肿瘤的来源、良恶性等信息，检测肿瘤标志物对癌症诊断和 治疗有重要意义。

蛋白是生物学功能的执行者，是研究和应用最广泛的标志物。蛋白生物标 志物的检测方法，通常是依据抗原与抗体特异性结合这一免疫学基本原理对蛋 白标志物进行免疫学检测，经常利用一些具有特殊物理化学性质的标记物对抗 体进行标记。

传统的免疫标记物包括放射性同位素、酶、胶体金和有机荧光染料分子等 等。

现有的检测技术是利用这些标记物标记已知的抗体，以此作为探针，检测 组织细胞上相应的抗原，在抗体与抗原识别后，通过对标记物的定性和定量检 测而达到对抗原检测的目的。

例如免疫荧光或免疫酶标检测技术，利用抗体与被检测组织抗原特异性结 合，再将这种特异性结合通过荧光染料分子或酶底物反应显色标记出来，用于 进一步鉴定组织细胞上蛋白标志物的表达情况。

这种以抗原抗体特异性结合反应原理为依据的检测方法能准确提供组织细 胞上某特定蛋白标志物的信息，但是这类检测技术需要酶或荧光染料分子等标 记物标记抗体(二抗)，再去标记组织细胞上抗原与抗体(一抗)结合的位置， 步骤复杂，操作时间长。因此，研究一种能快速、准确检测这种抗原与抗体结 合信息的技术对于肿瘤、感染性疾病或其他疾病相关的蛋白标志物的检测十分 有意义。

从物理学的角度，生物蛋白分子之间的相互作用可以利用力学来研究。现 有的力学测量技术中，原子力显微镜具有极高的力学分辨率(10^-12N)，且能在 近生理环境下利用探针对生物样本进行力学测量，适合用于检测生物分子的弹 性和黏附特性等力学性质。但是现有的用于力学测量的探针无法特异性识别组 织细胞上特定的蛋白标志物，目前市场上缺乏针对表达了特定的抗原或抗体的 组织细胞进行特异性检测的蛋白探针。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种蛋白探针的制备方法。

本发明的另一目的在于提供上述方法制得的蛋白探针在评估抗原抗体特异 结合上的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种蛋白探针的制备方法，包括以下步骤：

将机械探针针尖表面利用化学分子做修饰后，将探针针尖表面的化学基团 与连接分子的一端共价键结合，连接分子的另一端则与蛋白共价键结合，从而 形成具有特异性的蛋白探针；

所述的化学分子可以是3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)或乙醇胺盐酸盐；

所述的连接分子可以是缩醛聚乙二醇活性脂(acetal-PEG-NHS)、戊二醛、 乙醛聚乙二醇活性脂(aldehyde-PEG-NHS)或苯甲醛聚乙二醇活性脂 (benzaldehyde-PEG-NHS)中的一种；