[发明专利]一种用于减缓神经免疫反应治疗脑中风的siRNA纳米颗粒

说明书

本发明涉及一种用于减缓神经免疫反应治疗脑中风的脂质体siRNA纳米颗粒，将干扰Maclpil的siRNA用in vivo‑jetPEI(Polyplus‑transfection，USA)试剂盒包埋成脂质体颗粒，所述脂质体siRNA纳米颗粒可经静脉施用，发挥调控外周来源的LncRNA表达，进一步调节脑部炎症反应中巨噬细胞的极化状态的改变，发挥缓解缺血性脑卒中症状的效果，具有高度的特异性、安全性，制备方法简单，易于在临床转化应用。

技术领域

本发明属于药物领域，具体涉及一种用于减缓神经免疫反应治疗脑中风的siRNA纳米颗粒。

背景技术

在2019年最新出版的《中国脑卒中防治报告2018》，脑卒中排在我国国民死亡病因的第一位。据统计在我国，每12秒就有一个人发生脑卒中，每21秒就有一个人死于脑卒中。随着我国城市化发展与老龄化社会加速，人们的生活方式以及饮食结构都发生了很大的改变，脑卒中的发病率也有向低龄化及爆发性增长的态势。然而到目前为止，对急性脑卒中的治疗方法和手段仍然十分有限。现在临床上仅有两种主要的治疗方法：一是使用组织型纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator,tPA)；另一种是应用手术机械取栓，但是这两种方法都有着较严格的窗口期。因此，研究缺血型脑卒中的新型治疗方法显得极为迫切。近年来，随着神经免疫研究方向的兴起，免疫细胞介导的神经炎症对脑卒中的影响也开始受到关注。越来越多的实验数据证明，通过调节脑卒中后的免疫反应可以有效的缓解脑卒中的症状。近年来的基础研究发现，脑卒中引起的脑部炎症反应对脑梗的愈后起着关键作用。

现有的技术主要是通过对外周单核细胞中趋化因子的受体作为主要的靶点。具体来说，受损伤的脑组织分泌出的细胞因子和趋化因子会招募外周单核细胞迁移入脑。C-Cmotif chemokine receptor–2(CCR2)是一个G蛋白偶联受体，它的配体包含单核细胞趋化因子蛋白(Monocyte chemoattractant protein,MCP)家族的一系列趋化因子，例如CCL2,CCL7,CCL8等。国内外的相关研究也表明CCR2可调控外周单核细胞的迁移。例如在压力超负荷时心脏重构不良的小鼠模型中，CCR2会调节浸润的炎症性单核细胞的数量。在外周动脉病变中,如果抑制了MCP-1/CCR2的信号通路，可以阻止来源于骨髓或脾脏的经典的单核细胞CD14++，CD16-，CCR2++细胞的浸润。在脑卒中，炎性的单核细胞会通过MCP-1/CCR2的信号通路被招募进入脑梗死部位附近。通过利用流式质谱的方法(Mass Cytometry,CyTOF)，监测小鼠MACO模型中，11种参与神经免疫反应的免疫细胞的数量变化。结果显示在急性期，小胶质细胞及外周单核细胞迁移入脑极化成的巨噬细胞(Monocytes derived macrophages,MoDMs)数量增加的最为明显(Wang Y.et al,2020，submitted)。依赖于CCR2的单核细胞，在卒中的急性期会迁移入脑并增加脑部的炎症反应，加重病情；当使用CCR2 Knockout小鼠，或者CCR2的抑制剂Propagermanium(PG)时，卒中急性期迁移浸润到梗死区周围的单核细胞显著降低，MRI检测脑梗死体积减小且小鼠的死亡率降低。因此，减少外周的单核细胞迁移入脑的数量，可以显著缓解脑部的神经免疫反应。然而，对于CCR2这条分子通路的应用，Gliem等人的研究指出，早期删除骨髓来源的CCR2依赖的单核细胞很容易导致缺血性脑梗死后发生出血的现象。

LncRNAMaclpil高度特异的表达在由外周单核细胞极化并转移到脑梗部位的巨噬细胞(Monocytes derived macrophages,MoDMs)中，选择在MoDMs中高表达的LncRNA，期待能够为脑卒中的诊断，治疗提供更多的理论依据。由于MoDMs来源于外周，通过检测病人的外周血中特定的LncRNA的表达可以为脑梗筛查提供一个检测手段。LncRNAMaclpil还可以调控免疫反应中巨噬细胞的极化及功能，从而缓解脑梗病人的免疫炎症反应。