[发明专利]抗VSIG4单克隆抗体及其用途

说明书

本发明公开了一种抗VSIG4单克隆抗体，根据VSIG4抗原表位特异性分析，合成VSIG4特异性多肽，将VSIG4特异性多肽与KLH偶连后作为抗原免疫BALB/c小鼠，取免疫后BALB/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合，筛选获得分泌抗VSIG4单克隆抗体的杂交瘤细胞，抗VSIG4单克隆抗体的杂交瘤细胞采用动物体内生产法或体外培养法生产获得抗VSIG4单克隆抗体。本发明获取了VSIG4特异结合且具有抗肿瘤活性的单克隆抗体，适用于甲状腺未分化癌及胰腺癌等癌症的治疗。

技术领域

本发明涉及抗体生产技术领域，特别涉及一种抗VSIG4单克隆抗体及其用途。

背景技术

甲状腺癌是最常见的内分泌系统恶性肿瘤，也是近20年来发病率增长最快的人类恶性肿瘤之一。2018年世界范围甲状腺癌新发病例近56.7万例，其中中国约19.4万例，已成为我国多个地区女性第一高发恶性肿瘤，严重威胁我国居民的健康[1]。甲状腺癌分多种类型，其中，绝大多数是乳头状甲状腺癌，占了80%-90%，剩下10%-20%里包括滤泡癌、髓样癌、低分化癌、未分化癌等。除了甲状腺乳头状癌，其它几种类型的甲状腺癌预后差，尤其是甲状腺未分化癌（Anaplastic Thyroid Carcinoma, ATC），堪称人类最恶性的肿瘤之一。ATC患者的中位生存期不足6个月，1年生存率约17%，而5年生存率仅8%。2018年全国ATC新发病例近4000例，新增死亡病例约3440例，占甲状腺癌死亡总数的40%。ATC进展迅速，手术、外放射、碘131 、药物治疗疗效均极其有限，患者常死于局部肿瘤扩张引起的窒息或肿瘤远处转移[2-3]。因此，目前亟需寻找有效的治疗新靶点，以期突破该类患者的治疗瓶颈。

肿瘤相关巨噬细胞（Tumor Associated Macrophage, TAM）是肿瘤间质中数量最多的炎症细胞群，可促进肿瘤增殖、侵袭、转移及血管新生，尤其是肿瘤免疫逃逸[4]。研究表明，甲状腺癌中TAM的数量与生存期负相关，是甲状腺癌预后不利因素[5]。Caillou等发现在ATC组织中，TAM数量约占肿瘤组织细胞总量57%，且相互联系形成网状结构[6]，这种病理结构为ATC细胞提供极佳的“免疫豁免区”。生理免疫状态下，巨噬细胞识别抗原后首先将表面抗原肽-MHC分子复合物呈递给T细胞识别，并通过表达协同刺激信号B7分子与T细胞表面CD28结合活化T细胞，进而介导免疫应答。然而在肿瘤微环境中，TAM表型及功能受肿瘤细胞严密调控，TAM大量表达负性共刺激分子与PD-1、CTLA-4等免疫检查点蛋白，抑制T细胞抗肿瘤免疫应答，促使肿瘤发生免疫逃逸[7]。与正常细胞相比，ATC细胞作为一种截然不同的“非己”成分，理论上会被宿主免疫系统识别并清除，然而，ATC细胞的生长却无法被免疫系统限制，因此，寻找肿瘤免疫逃逸机制并解除免疫抑制是治疗ATC的潜在策略。

随着近几年免疫检查点抑制剂在实体瘤治疗中的成功，免疫疗法为恶性肿瘤的治疗带来新思路。已有个案报道对存在BRAF突变及PD-L1高表达的ATC患者通过维罗非尼联合纳武单抗进行治疗，可使患者肿瘤明显消退，且可持续20个月[8]。该研究提示免疫疗法在ATC治疗中的潜力，但值得注意的是，Ahn等通过407例甲状腺癌组织进行PD-L1免疫组化染色，发现ATC组织中肿瘤细胞和免疫细胞PD-L1表达阳性率仅为22.2%和11.1% [9]，提示该方案并不适合于多数ATC患者的治疗。

VSIG4与PD-L1，PD-L2同属于B7家族，可抑制T细胞功能或补体旁路途径的活化，从而调节自身免疫疾病及炎症疾病的发展[10-11]。Hepatology的研究表明，枯否细胞表达VSIG4可对抗T细胞及NK细胞引起的自身免疫肝损伤[12]。最新的研究发现，VSIG4可抑制杀伤型巨噬细胞（M1）极化，改善爆发性肝炎及高脂饮食引起的肥胖[13]。流行病学结果显示，VSIG4强表达是恶性胶质瘤、非小细胞肺癌等肿瘤的预后不利因素[14-15]。然而，VSIG4如何促进肿瘤的发生发展研究甚少，目前仅有研究指出VSIG4阳性TAM可促进肺癌的发展[15]。